肝细胞肝癌(HCC)是一种恶性度极高的常见肿瘤，通常发现较晚而病情发展迅速。化疗是能够有效治疗肝癌的重要手段之一，化疗药物一般通过多种途径诱导肝癌细胞发生凋亡，即程序性死亡，达到消灭肿瘤细胞的目的。凋亡是一种由基因调控的自主性自身破坏过程，可使细胞形态发生改变、DNA断裂和蛋白发生交联。凋亡细胞数量减少是肿瘤产生的根本原因之一。目前有研究发现多种化疗药物特别是DNA损伤化疗药物在杀伤肿瘤细胞时能够诱导核因子κB激活。核因子κB是一种存在广泛，作用多样的转录因子，与凋亡、炎症、损伤、免疫反应等都有密切的联系。本实验旨在探索肝癌组织中核因子κB及其下游抗凋亡基因Bcl-2的表达与肝癌发生、发展的联系，以及两者之间的相互关系。观察肝癌细胞中核因子κB在化疗药物阿霉素作用下在细胞核和细胞浆内的变化，研究其在阿霉素诱导凋亡过程中的作用及核因子κB特异性抑制剂的对抗作用，探寻肝癌细胞对化疗药物诱导凋亡发生抵抗的机理以及使用相应的抑制方法进行抑制，从而为有效提高化疗药物的治疗效率提供一定的实验基础。第四军医大学硕士学位论文 目的: 探索核因子虑(NF一沼)在肝癌的表达变化，以及与病理分期和其下游抗凋亡基因Bcl一2表达的相关性。人肝癌细胞(SMMC一7721)中核因子虑在化疗药物阿霉素诱导前和诱导后在细胞浆和细胞核中的表达变化，以及使用核因子虑特异性抑制剂PDTC对核因子虑的激活进行抑制，观察这一过程中SMMC一7721肝癌细胞的凋亡变化。 方法: 采用免疫组织化学方法，检测NF一出在40例肝细胞肝癌及巧例正常肝组织中的表达变化及抗凋亡基因Bcl一2的相应表达。应用免疫组化SABC法观察核因子虑被阿霉素激活时在细胞浆和细胞核的表达变化。提取SMMC一7721肝癌细胞核蛋白，ELISA法检测阿霉素作用下和阿霉素、PDTC共同作用下不同时间细胞核中核因子沼的变化。M竹实验和Tunel法分别检测两种情况下SMMC一7721细胞的死亡率和凋亡指数(Al)变化。 结果: NF一忍在肝癌组和正常肝组织组的阳性表达率分别为72.5%、3既，两者间具有显著性差异(尸<0 .01)，强阳性表达率为13%、7%，Bd一2在肝癌组和正常肝组织组的阳性表达率分别为40%、7%，两者间具有显著性差异(P<0.05)，强阳性表达率为17.5%、0。NF一沼的阳性表达在病理分级间有显著性差异(P<0.01)且与Bcl一2的阳性表达有显著相关(二0.389，P二0.013)。在阿霉素诱导下核因子忍由细胞浆转移至细胞核，作用3h后核因子虑明显出现在细胞核中，IOh左右达到高峰，而在细胞浆的表达逐渐减少。提取SMMC一7721肝癌细胞核蛋白，EUSA法检测阿霉素作用下和阿霉素、PDTC共同作用下3h、6h、12h核因子虑在细胞核中的变化，A值分别为0.106士0.25、0.29士0.039、0.83士0.14和0.0055士0、0.01士0、0.014士0。MTT实验:阿霉素组IC50为0.15，阿霉素加PDTC组IC50为0.07。Tunel法检测阿霉素组、阿霉素加PDTC组作用24h、48h、72h后肝癌细胞凋第5页第四军医大学硕士学位论文亡指数(Al)分别为2.5%、5%、15%和一6%、43%、49%。 结论: NF一虑异常表达可能与肝癌的发生、发展有关，并在一定程度上可以解释肝癌对化疗的抵抗作用。NF一虑与Bcl一2高度相关，表明NF一忍可以通过对下游抗凋亡基因表达的调控，参与了肝癌的抗凋亡过程。SMMC一7721细胞中的核因子沼可以被阿霉素类DNA损伤药物激活，由胞浆转移至细胞核，发挥其基因调控作用，对凋亡过程进行抑制，核因子忍特异性抑制剂PDTC可以有效抑制这一过程。核因子沼的激活被PDTC特异性抑制后比未加抑制剂时，细胞凋亡数量显著增加，IC50值降低，证实核因子虑的激活可以有效抑制SMMC一7721细胞凋亡。这一结果预示采用高特异性核因子沼抑制剂，结合使用化疗药物，可以有效提高肿瘤患者的化疗效果，为肿瘤治疗提出一条新途径。