对虾白斑综合症病毒(WSSV)的检测和VP28基因的表达

来源 :华南热带农业大学 海南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ren971211
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对虾白斑综合症病毒(white spot syndrome virus,WSSV)是对全球对虾的主要病原之一,对全球对虾养殖业造成严重的损失。本研究根据报道的序列,设计3对特异性引物并对其进行筛选、同时对报道的PCR制备模板方法进行改进、对建立的PCR反应体系进行优化。通过以上实验建立一套稳定,快速的WSSV PCR检测体系。本研究根据报道的WSSV分离物VP28基因全序列,设计1对引物,分别以海南分离病株和广西分离病株的总DNA为模板,通过PCR方法克隆了WSSV的VP28基因全序列。通过序列比对,发现这两个分离病株的VP28基因的核酸同源性为99%;其对应的氨基酸序列同源性为100%。用DNAsisst、clustalxa.83软件对世界不同地域分离物进行同源分析,发现VP28基因的核酸同源性为99%或以上。通过以上的序列分析得出VP28基因在进化上非常保守。克隆WSSV VP28基因,并将它重组到细菌表达载体pET-30a(+)中,酶切和序列测定均表明成功构建了重组表达载体pET-30a-VP28。将重组表达载体导入表达宿主菌BL21(DE3),经终浓度为1mmol/L的IPTG诱导进行表达,SDS-PAGE显示pET-30a-VP28在BL21(DE3)中获得表达,这为以后制备特异性抗血清,开展WSSV的快速、有效的检测和WSSV亚单位疫苗的研制鉴定了基础,同时为探索外源基因的表达途径积累了经验。
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