【摘 要】
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目的:研究小干扰RNA(siRNA)对前列腺癌(Prostate cancer,Pca)细胞株LNCaP细胞中CXC趋化因子受体4(CXCR4)mRNA表达的影响。方法:选择人CXCR4基因的一个靶点,体外合成siRNA的DN
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目的:研究小干扰RNA(siRNA)对前列腺癌(Prostate cancer,Pca)细胞株LNCaP细胞中CXC趋化因子受体4(CXCR4)mRNA表达的影响。方法:选择人CXCR4基因的一个靶点,体外合成siRNA的DNA模板,经退火后插入到质粒Psilencer 2.1-U6 neo载体的多克隆位点,构建siRNA表达载体。重组表达质粒在脂质体Lipofectamine 2000介导下转染人前列腺癌细胞株LNCaP细胞,用RT-PCR方法检测重组体对CXCR4 mRNA表达水平的影响。实验设立空白对照组、阴性对照Psilencer-C转染组、和目的组Psilencer-siCXCR4转染组。结果:经酶切、测序证明重组质粒Psilence-siCXCR4构建成功;该重组体转染LNCaP 48小时后, RT-PCR检测结果显示CXCR4/β-actin条带光密度比值分别为:空白对照组为0.61±0.03;阴性对照组为0.59±0.04;目的组为0.15±0.01。空白对照组与阴性对照组比较差异无统计学意义(P﹥0.01),目的组分别与空白对照组、阴性对照组比较,差异均有统计学意义(P﹤0.01);其抑制率为(75.00±3.16)%,表明LNCaP细胞中CXCR4 mRNA表达受到明显抑制。结论:本实验所设计的RNA干扰序列、构建的RNA干扰重组体有效地抑制了前列腺癌细胞株LNCaP细胞中CXCR4 mRNA的表达,与我们的预期结果一致。我们结果与许多国内外的研究结果相符。说明RNA干扰对LNCaP细胞中CXCR4 mRNA的表达有明显抑制作用。为进一步运用RNA干扰技术研究SDF-1/ CXCR4通路与前列腺癌骨转移的关系提供了一定的基础
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