番茄抗灰霉菌基因YLS9-LIKE的克隆和功能鉴定

来源 :南京农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ym_l
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通过对本实验室的300多份重测序材料进行灰霉菌的接病,经过三次重复接病,根据接病后的病斑面积的差异与重测序番茄的SNP差异关联分析,从而得到了与番茄灰霉病抗性显著相关的10个SNP位点,从中筛选候选基因并对基因进行功能验证。其中,YLS9-LIKE(YL)的超量表达转基因植株的感病性相对背景材料 A57显著增强。YLS9-LIKE与拟南芥中的HIN1和烟草中的SDR1同源性较高,其与衰老和SA依赖的抗病性相关。接下来对YLS9-LIKE做进一步的功能验证,结果如下:  1.对YLS9-LIKE的超量和干涉转基因植株进行接病,接病结果显示,与A57相比,超量转基因植株的感病性明显增强,干涉转基因植株的感病性没有发生明显改变。  2.YLS9-LIKE的超量转基因植株从苗期就呈现出颜色变浅,经测定是因为叶绿素含量下降引起的,还导致了植株变矮。  3.相对于A57,YLS9-LIKE的超量转基因植株的叶片通过甲苯胺蓝染色发现叶片的渗透性增加。  4.相对于A57,YLS9-LIKE的叶片的果胶含量显著减少,经果胶酶酶解面积显著变小。  5.相对于A57,在灰霉菌接病后,YLS9-LIKE的超量转基因植株的活性氧爆发更快,更严重。  6.在 A57的组织表达谱中,生理后期的YLS9-LIKE的表达量较前期要高,说明YLS9-LIKE可能与生长发育和衰老相关。  7.酵母双杂交和BIFC结果显示,YLS9-LIKE与rbcS3b。而Rbcs3b是光合作用中的一个重要的基因,而且叶绿体与植物抗病性有着重要的联系。  8.通过VIGS干涉Rbcs3b后,取得与YLS9-LIKE超量表达植株类似的表型:叶片颜色变浅、感病性增加、植株变矮等。  9.石蜡切片结果显示,相对于A57,YLS9-LIKE超量转基因植株的细胞间更松散、空洞更大。  10.YLS9-LIKE超量表达植株的光合作用效率相对A57显著下降,可能是因为叶绿素含量下降引起。
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