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尿失禁是妇女的一个常见症状,它包括多种类型,如真性尿失禁、功能性尿失禁、压力性尿失禁、急迫性尿失禁等。在这些疾病中,以压力性尿失禁(stress urinary incontinence, SUI)最常见,其发病率约占尿失禁总发病率的50%-70%。目前,国内外对于SUI的定义如下：当增加腹压甚至在休息时,膀胱颈和尿道不能维持正常的压力,而有尿液不自主溢出的现象。SUI严重影响妇女的生活质量,随着世界人口老龄化程度的加重,SUI越来越多的受到广大学者的重视,为从根本上防范SUI的发生,学者对其病因进行了广泛的研究,但是目前尚未得到一致结论。盆底支持组织的衰弱与SUI的发生密切相关。弹性蛋白(Elastin)、胶原蛋白、层粘连蛋白等是盆底支持组织细胞外基质(extracellular martrix, ECM)的主要成分。有研究发现,胶原蛋白的含量、结构、功能、Ⅰ/Ⅲ型胶原相应比例异常与SUI的关系密切。另有研究证实,盆内筋膜代谢活跃,胶原的分解增加可能参与SUI形成。而弹性蛋白也是盆底支持组织中的一个主要成分,它能使所在组织具有伸缩性和可逆的变形能力,对于维持盆底组织功能的维持也有重大意义,目前Elastin在盆底器官脱垂(pelvic organ prolapse, POP)成因方面有所涉及,但是在SUI的发病原因方面国内外尚未有研究。基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMPs)是调节ECM代谢的重要酶类,在盆底支持组织合成及分解代谢方面起着直接或间接的作用。MMPs是一组含Zn2+的蛋白酶家族,它能够降解ECM和基底膜,包括以下五大类：(1)胶原酶(MMP-1, MMP-8);(2)膜型蛋白酶(MT1-MMP、MT2-MMP等)；(3)明胶酶(MMP-2和MMP-9)；(4)基质溶解素(MMP-3, MMP-7, MMP-10);(5)弹性蛋白酶(MMP-12)。其中MMP-12的主要作用底物是弹性纤维、层粘连蛋白、纤粘连蛋白等。已有大量研究表明MMP-12在食管癌、上皮性卵巢癌、肺癌及结肠癌等疾病中均呈高表达,因人类女性阴道壁组织中含有弹性纤维,推测MMP-12与女性SUI的发病机制也有关联。基质金属蛋白酶抑制剂(tissue inhibitors of metalloproteinases, TIMPs)是一个多基因家族的编码蛋白对MMPs有负调节作用。TIMP-1是MMP-12的特异性抑制剂,在生理状态下,二者保持平衡,使体内Elastin的破坏与重建维持在正常水平。而当这种平衡状态被打破时,会引发体内一系列的病理情况。因此推测体内MMPs与TIMPs调节失衡也是SUI发病的原因之一。目的本课题取人阴道前壁组织为实验对象,用免疫组织化学方法检测各实验组对象阴道壁组织中MMP-12、TIMP-1、Elastin的含量,并对三指标之间的相关性进行分析,同时用RT-PCR法检测各组中Elastin mRNA的含量。了解MMP-12 TIMP-1、Elastin的表达与女性SUI之间的关系,以期今后能够从病因上为SUI的治疗提供依据。材料与方法1材料选取2009年8月到2010年2月在郑州大学第三附属医院妇科住院治疗的SUI患者(SUI组)30例,年龄在37-60岁之间,平均55.30±5.87岁；POP患者(POP组)30例,年龄在40-59岁之间,平均53.31±5.93岁；并选择非卵巢功能性肿瘤及宫颈上皮内瘤变患者30例作为对照组,在38-65岁之间,平均55.43±4.48岁。选取标准：SUI组：有尿失禁症状,根据妇科检查、各项辅助检查如尿动力学检查和尿垫试验等确诊为SUI,并排除不稳定膀胱、充盈性尿失禁及尿路感染等情况；POP组：患者自述无SUI症状,妇科检查有中度及以上阴道前壁膨出,辅助检查均证实无尿失禁；对照组：无尿失禁症状,妇科检查无盆底器官膨出,术后病理检查证实为非雌激素相关性疾病。取材部位：均选取阴道前壁上段12点处组织,大小约0.5cm×0.5cm×0.5cm。SUI组采用TVT-O、TVT-S手术或者阴道前壁修补术,POP组患者采用前盆底悬吊术、阴道前壁修补术,对照组采用子宫全切术(阴式或腹式)。经样本均衡性测定,三组病人在产次、年龄、体重指数等方面差异均无显著性(P>0.05)具有可比性。患者术前均签署知情同意书。2方法采用免疫组化S-P法,操作步骤遵循于试剂盒说明书,检测三组患者阴道壁组织中MMP-12、TIMP-1、Elastin的表达情况,并同时使用RT-PCR方法检测三组患者阴道壁组织中的Elastin RNA的含量,从分子水平研究Elastin的表达情况。3结果判定和图像分析3.1免疫组化法于显微镜下观察,阴道壁粘膜下结缔组织中各指标所表达部位呈现淡黄色至棕黄色颗粒沉着为阳性表达,MMP-12及TIMP-1主要定位在胞浆,Elastin主要定位于间质。全面观察每张切片中各指标的表达情况,从中随机选取5个有代表性的高倍视野(40×10倍),电子计算机图像分析仪计算分析各免疫组化染色阳性区的平均灰度值。染色强弱与平均灰度值之间成正比。3.2 RT-PCR法电泳后,照相记录,以内参基因β-actin为基准分析各条带的平均灰度值4统计学分析应用Excel 2003录入数据,各组数据的灰度值以均数±标准差(x±s)表示,用SPSS16.0软件包进行统计学分析。采用单因素方差分析比较三组间数据资料,用LSD-t检验进行组间两两比较,Pearson相关性分析比较各指标间的相关性。各种检验方法均以α=0.05为检验水准。结果1免疫组化法1.1各组患者阴道壁组织中MMP-12的表达MMP-12在3组阴道壁粘膜下结缔组织胞浆中都有表达,在SUI组与POP组的表达均比对照组强,差异有统计学意义(P<0.05)；而在SUI组与POP组之间的表达强度未见明显差别,差异无统计学意义(P>0.05)。1.2各组患者阴道壁组织中TIMP-1的表达TIMP-1在3组阴道壁粘膜下结缔组织胞浆中都有表达,在SUI组与POP组的表达均比对照组弱,差异有统计学意义(P<0.05)；而在SUI组与POP组之间的表达强度未见明显差别,差异无统计学意义(P>0.05)。1.3各组患者阴道壁组织中Elastin的表达Elastin在3组阴道壁粘膜下结缔组织间质中都有表达,在SUI组与POP组的表达均比对照组弱,差异有统计学意义(P<0.05)；而在SUI组与POP组之间的表达强度未见明显差别,差异无统计学意义(P>0.05)1.4 SUI组中MMP-12、TIMP-1、Elastin的相关性分析对SUI组阴道壁组织中三指标表达的平均灰度值进行相关性分析,结果显示：MMP-12与TIMP-1之间呈显著负相关(r=-0.999,P<0.05),MMP-12与Elastin之间呈显著负相关(r=-0.614,P<0.05),TIMP-1与Elastin的表达呈显著正相关(r=0.628,P<0.05)。2 RT-PCR法计算3组阴道壁粘膜中Elastin mRNA表达,在SUI组与POP组的表达均比对照组弱,差异有统计学意义(P<0.05)；而在SUI组与POP组之间的表达强度未见明显差别,差异无统计学意义(P>0.05)。结论MMP-12、TIMP-1可能通过对Elastin的调节参与SUI的发生