论文部分内容阅读
番茄是一种世界性蔬菜,经济价值很高。杂种优势利用是目前国内外番茄育种的主要方法,培育优良自交系是其关键,花药(粉)培养的单倍体育种方法是获得优良自交系最有效途径。然而,番茄花药(粉)培养十分困难,成功率极低,30年来进展缓慢,只有少数研究者获得了单倍体植株。本研究通过对番茄花药离体培养影响因素的系统研究,旨在为建立高效的番茄花药培养再生体系奠定基础。
本研究以南方生态型番茄品种为试材,从小孢子发育的细胞学特征、小孢子发育时期与花蕾外部形态对应关系、离体小孢子活力变化及提高其活力方法、花药愈伤组织诱导的影响因素、愈伤组织分化培养基的筛选、愈伤组织染色体数观察及其来源分析等方面对番茄花药离体培养技术进行了系统研究。主要实验结果如下:
1、运用石蜡切片和显微观察方法,首次探明了华南生态环境种植条件下,番茄小孢子发育时期与花蕾外部形态对应关系。小孢子处于单核靠边期的花蕾特征是:瓣萼比在1左右,花药自绿色或花药白绿色,药尖浅紫色。
2、从低温处理、高温处理和甘露醇处理等三方面探讨了提高番茄离体小孢子活力的方法与效果。低温(4℃)处理2 d是提高小孢子活力的有效方法。
3、番茄花药培养关键性的第一步即花药愈伤组织的诱导在本研究中取得重要进展,筛选出了适应性广的培养基配方,供试的41个基因型均能诱导出愈伤组织。该培养基配方是:MS+ZT0.5 mg/L+IAA 1.0 mg/L+2%蔗糖+0.7%琼脂。
4、从花药预处理、培养基的激素成分、基因型、碳源、接种密度、接种方式、活性炭和取蕾时期等方面对影响番茄花药愈伤组织诱导的各种因素进行了研究。研究发现,低温预处理能明显提高愈伤组织诱导率,适宜的预处理方式是4℃,2 d。不同基因型对高温预处理反应不一,甘露醇预处理的花药没有产生愈伤组织。激素NAA和KT搭配很难诱导出愈伤组织,ZT和IAA配比能提高愈伤诱导率。基因型对番茄花药愈伤组织诱导有很大影响,在供试的41种基因型中,最高愈伤诱导率为59.17%,最低只有2.50%。麦芽糖作为培养基碳源,其效果好于蔗糖,乳糖不适合作番茄花药培养的碳源。番茄花药接种方式以平贴培养为好,适宜的接种密度为0.8枚/ml。在番茄植株生长过程中,有限生长类型的番茄花药愈伤组织诱导率有一个高峰期,即第一花序开放后的第5周,而无限生长类型的番茄至少有两个高峰期,即第3周或第5周和第12周。
5、设计30种培养基,接种4025块愈伤组织,最终分化出7个不定芽,但这些芽均为畸形芽,接种到生根培养基上后褐化死亡。愈伤组织的分化培养是番茄花药培养最困难的一步,还有待进一步研究。
6、番茄花药愈伤组织细胞核染色体数观察结果显示,本研究获得的愈伤组织至少有30%来源于小孢子。