帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是一种常见的中老年人渐进性中枢神经系统变性疾病。PD的发病率和患病率随年龄的增长而增加,而且随着社会老龄化、环境污染的加剧,其发病率会逐渐增高,PD进展缓慢。其病理生化特征是中脑黑质纹状体系统多巴胺能神经元变性死亡,黑质-纹状体DA通路变性,导致脑内多巴胺神经递质减少,乙酰胆碱(Ach)系统功能相对亢进;其临床表现主要为静止性震颤、肌僵直、运动迟缓、姿势步态异常四大主征,被认为是目前世界上最常见的严是严重影响中老年人健康的主要疾病之一。目前PD的治疗主要是左旋多巴的替代治疗,并不能阻止病情的进展。如何保护多巴胺能神经元、减少其变性死亡、阻止PD病情的进展,寻找有效的神经保护治疗方法非常必要。目的:探索依拉地平是否对蛋白酶体抑制剂lactacystin诱导多巴胺能(肾上腺嗜铬细胞瘤细胞,PC-12)细胞的损伤具有保护作用及其机制,从而为PD的神经保护治疗提供一个新的思路。方法:选用大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤(PC12)细胞株,利用蛋白酶体抑制剂诱导其细胞凋亡,建立帕金森病细胞模型。在用依拉地平进行干预,采用MTT法检测细胞活性、流式细胞仪以及TUNEL法检测细胞凋亡、免疫细胞化学染色法观察酪氨酸羟化酶(TH)以及α-突触核蛋白表达的变化、采用(Fluo4/AM)流式细胞仪法检测细胞内钙离子荧光强度的变化。结果:1.模型制作在PC-12细胞培养体系中加不同剂量Lactacystin使其终浓度分别为5、10、15、20μmol/L,其细胞存活率分别为78.24%±12.35%、63.88%±11.80%、60.18%±8.95%、58.26%±9.56%。结果显示随着Lactacystin浓度的增高,PC-12细胞存活率逐渐下降,呈剂量依赖。Lactacystin组TH阳性细胞数为5.06±2.18个,明显低于对照组38.86±7.40个(P <0.01);α-突触核蛋白阳性细胞数为26.39±1.93个,明显高于对照组15.78±2.14个(P <0.01)。结果提示Lactacystin导致多巴胺能神经元减少,α-突触核蛋白表达增加。Lactacystin组细胞凋亡率为11.21%±4.1%,明显高于对照组0.88%±0.18%(P <0.01);TUNEL阳性细胞率为80.89±13.47个,明显高于对照组5.92±3.16个(P <0.01)。结果提示Lactacystin导致PC-12细胞凋亡。2.依拉地平对Lactacystin诱导PC-12细胞凋亡的保护作用在PC-12细胞培养体系中分别加入不同剂量依拉地平使其终浓度为5、10、20umol/L,在上述各组中加入适量Lactacystin使其终浓度为10umol/L,共同培养24小时后测其细胞存活率分别为64.32%±7.98%、70.66%±9.95%、75.02%±8.63%。在上述各组中20umol/L依拉地平组细胞存活率明显高于Lactacystin组63.88%±11.80%(P <0.05),其余各组与Lactacystin组相比无统计学差异。20umol/L依拉地平组TH阳性细胞数为17.00±4.37个,明显高于Lactacystin组5.06±2.18个(P<0.01);α-突触核蛋白阳性细胞数为18.58±4.4个3明显低于Lactacystin组26.39±1.93个(P<0.01)。结果提示依拉地平组的PC-12细胞存活率高于Lactacystin组。20umol/L依拉地平组细胞凋亡率为3.15%±1.61%,明显低于Lactacystin组11.21%±4.1%(P <0.01);TUNEL阳性细胞率为18.14±7.86个,明显低于Lactacystin组80.89±13.47个(P <0.01)。结果提示依拉地平组细胞凋亡率低于Lactacystin组。3.钙离子浓度变化在PC-12细胞培养体系中加入依拉地平(终浓度20umol/L),细胞内钙离子荧光强度与对照组比较没有统计学差异。加入Lactacystin(终浓度10umol/L)后细胞内钙离子荧光强度明显下降,随着时间的延长降低越来越明显,0.5小时、1小时、1.5小时、2小时及24小时所测胞内钙离子荧光强度均较对照组相应时间点明显下降(P<0.05)。依拉地平(终浓度20umol/L)+Lactacystin(终浓度10umol/L)共同处理组在0.5小时、0.75小时、1小时细胞内钙离子荧光强度与lactacystin组相比,差异不显著(P>0.05),与对照组比较明显下降(P<0.05),然而前者在1小时后细胞内钙离子荧光强度有逐渐回升的趋势,24小时回升至89.97±15.63,与lactacystin组相比显著增高(P<0.05),并且与对照组相比没有差相差不显著(P>0.05)。结论:1.蛋白酶体抑制剂lactacystin能导PC-12细胞凋亡。2.蛋白酶体抑制剂lactacystin能导致PC-12细胞钙离子浓度下降。3.依拉地平可以抑制蛋白酶体抑制剂lactacystin诱导的PC-12细胞凋亡。