糖尿病是一组以高血糖为特征的代谢性疾病。若得不到及时的医治,将会引发一系列的并发症。它现已成为威胁人类健康的最大杀手之一。胰岛素是由胰腺β细胞分泌产生的一类多肽类激素,是机体内唯一降低血糖的激素。因此对胰岛素的研究是极为重要的。胰岛素从问世至今已有90年历史,90年来,根据胰岛素来源和化学结构不同,胰岛素产品经历了从动物胰岛素、人胰岛素到胰岛素类似物的三大跨越。20世纪90年代,人们利用基因工程技术对人胰岛素的氨基酸序列及结构进行局部修饰,合成了人胰岛素类似物。改变了胰岛素的药代动力学特征,胰岛素类似物在药用胰岛素的历史上翻开了新的篇章。速效胰岛素是一类通过基因工程方式获得,与餐后正常人体内胰岛素分泌代谢最为接近的胰岛素类似物。近年来,速效胰岛素以其吸收快、安全性好等特点受到越来越多研究者的关注。目前,市场上现有的速效胰岛素共有三种:赖脯胰岛素、门冬胰岛素和赖谷胰岛素。B27K-DTrI即B27赖氨酸去三肽胰岛素是2005年由丁金国等人利用甲醇酵母表达系统成功制备的单体速效胰岛素类似物。经小鼠惊厥法测定,在体内保留了80%的胰岛素活性。分子筛实验表明重组B27K-DTrI的单体性质比商品化的赖脯胰岛素单体性质更好,因此它具有成为新型速效胰岛素类似物的潜力。但是无论是利用甲醇酵母表达系统还是大肠杆菌IMPACT-TWIN表达系统制备B27K-DTrI,其前体蛋白的可溶性较差,且后期纯化操作十分繁琐,最后的蛋白得率过低,影响了B27K-DTrI的应用前景。MIP是B27K-DTrI蛋白前体,经胰蛋白酶酶切即可制备得到B27K-DTrI。因此,获得高产量和高纯度的MIP是得到最终产物B27K-DTrI的关键。本文报道了利用大肠杆菌ppSUMO表达系统制备MIP的实验过程。利用ppSUMO表达系统的优势,提高了前体融合蛋白的可溶性。纯化过程无需进行繁琐的复性操作,大大提高了SUMO-MIP融合蛋白的产量。经过亲和纯化,每升TB细胞可以获得30.1 mg,>75%纯度的融合蛋白。通过离子交换色谱、分子筛等方式,进一步纯化蛋白,每升细胞可以获得17.5 mg,>95%纯度的融合蛋白。最后经过ULP1酶酶切,融合蛋白SUMO-MIP转化为MIP,为B27K-DTrI的制备打下了基础。