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猪繁殖呼吸综合征病毒(PRRSV)可引发猪繁殖与呼吸综合征(PRRS),该病是一种高度接触性传染病。本病传播快速,对养猪业造成的经济损失占猪传染病总损失的三分之一。PRRSV是一个RNA病毒,且为单股的正链RNA,它的基因组大约为15Kb,PRRSV的特点是不分节段、聚腺苷酸化、具备囊膜,且有十分严格的细胞嗜性,PRRSV侵染宿主细胞依赖于其配体与细胞上的受体的结合,因而研究细胞受体有利于阐明病毒与宿主细胞的相互关系,以便进一步得知病毒进入细胞的机制以及病毒对宿主细胞的影响。PRRSV在侵染宿主细胞时有一个重要的受体—CD163,该受体在病毒脱衣壳及病毒的基因组释放时都起重要作用,此外,该受体还可以使PRRSV在非敏感细胞系中复制。CD163富含半胱氨酸,有1个信号肽和9个SRCR结构域,以及两个PST区域,此外在跨膜区内部还有一个5.6KDa的胞质尾区。研究发现,CD163胞质尾区缺失对它自身在细胞内的表达量没有影响,但是病毒蛋白表达和子代病毒粒子产量都比表达全长CD163的高。因此,胞质尾区极有可能是细胞感应PRRSV感染的一个关键元件,在宿主信号机制中有一定的作用,进而调控PRRSV在细胞内的复制,但其调控机制尚不明确,这就需要我们进一步解析CD163胞质尾区参与病毒感染的机制,这有助于揭示PRRSV的侵染机制,并对抗PRRSV感染药物的开发具有重要的指导价值。本研究构建了GST-CD163-tail重组载体,并将其导入原核表达系统,利用Sepharose4B珠子对大量表达的可溶性GST-CD163-tail蛋白进行初步纯化,将纯化蛋白作为诱饵蛋白通过Pull down与PRRSV感染后0h、24h和48h的Marc-145进行相互作用,以期筛选得到经PRRSV感染后与CD163胞质尾区互作的蛋白。将Pull down的结果经质谱分析筛选到了一个可对病毒感染做出应答的蛋白质(蛋白延长因子-1)。另外,本文应用高通量测序技术进行了PRRSV感染12h(M12)和非感染(M0)Marc-145两个组的small RNA和mRNA测序,每组分别设置3个重复。分析了实验组M12和对照组M0共6个样本的miRNA与mRNA,筛选了在两种样本中差异表达的miRNA与差异表达基因(mRNA)。结果显示:相对于M0,M12中显著上调和下调的miRNA分别有12个和4个,显著下调的mRNA有552个、显著上调的mRNA有768个。随后,利用RNAhybrid、PITA、miRanda三个软件针对差异miRNA进行了靶基因预测,并对这些靶基因和差异的mRNA分别进行了GO分析和KEGG通路富集,最后将差异miRNA的对应靶基因与差异表达基因进行了miRNA和mRNA的关联分析,并对关联到一起的基因进行了GO分析和KEGG通路富集以及调控网络分析,以便从差异miRNA及差异表达基因中筛选出与病毒感染相关的关键调控因子或候选基因。通过以上分析,本研究推测novel-70和miR-27a-5P两个miRNA可能与PRRSV感染关系比较密切,本课题组将进一步通过实验验证这两个miRNA在PRRSV感染过程中的具体功能。