【摘 要】
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猪乙型脑炎（Japanese encephalitis,JE）与猪细小病毒病（Porcine Parvovirus disease,PPD）是猪的两种繁殖障碍性疾病,病原分别为乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）和猪细小病毒（Porcine Parvovirus,PPV）。二者均可引起母猪流产、产木乃伊胎、产死胎、产弱仔及公猪精液质量下降等临床症状。目前,
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猪乙型脑炎（Japanese encephalitis,JE）与猪细小病毒病（Porcine Parvovirus disease,PPD）是猪的两种繁殖障碍性疾病,病原分别为乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）和猪细小病毒（Porcine Parvovirus,PPV）。二者均可引起母猪流产、产木乃伊胎、产死胎、产弱仔及公猪精液质量下降等临床症状。目前,分别利用猪用乙型脑炎活疫苗和猪细小病毒灭活疫苗进行免疫接种,是临床上防控这两种传染病的最有效手段。鉴于猪乙型脑炎和猪细小病毒病均是危害种猪的繁殖障碍性疾病,且容易发生混合感染,本研究旨在进行猪源乙型脑炎病毒灭活疫苗的研制,并在此基础上,进行“猪乙脑-猪细小”二联灭活疫苗的制备,达到一针防两病的目的。1.猪源乙型脑炎病毒灭活疫苗的研制采用本实验室分离鉴定的猪源乙型脑炎病毒（GX1209株）进行相关试验。通过优化增殖条件,病毒在BHK-21细胞上的增殖滴度可达10~9PFU/m L以上,且可在-80℃长期保存。病毒的理化特性研究表明,该毒株对乙醚、温度、胆盐、氯仿、酸性敏感,对胰蛋白酶不敏感。在此基础上,分别从灭活剂、灭活条件、佐剂、动物模型等方面开展了制苗工艺研究,确定了制苗的最佳条件为:灭活剂为甲醛,灭活剂浓度为0.05%,灭活温度为37℃,灭活时间为72 h;佐剂为法国VG201佐剂,佐剂与病毒液的配比为1:1。将按照上述工艺制备的猪乙脑灭活疫苗免疫4周龄Babl/c小鼠,二次免疫后攻毒保护率可达100%。猪的免疫实验结果显示,被免疫猪体温监测正常,二免后第2周JEV抗体水平达到最高,且3个月内均可维持较高抗体水平。2.“猪乙脑-猪细小”二联灭活疫苗的初步研究利用IBRS2细胞增殖猪细小病毒（WH-1株）,经0.5%甲醛溶液于37℃灭活48 h后,按照1:1比例与已灭活的JEV（GX1209株）混合,制成病毒混合液。然后按照1:1的比例,将VG201佐剂与病毒混合液进行配比并乳化,制成猪乙脑-猪细小二联灭活疫苗。动物免疫实验显示,该二联疫苗二次免疫4周龄Babl/c小鼠后,对JEV的免疫保护效率可达100%,PPV的HI抗体水平可达1:2~8。猪的免疫实验结果显示,被免疫猪体温监测正常;抗体消长规律监测显示,疫苗二次免疫后第2周JEV中和抗体水平达到最高,且在监测的3个月内均可维持较高抗体水平。
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