百菌清降解菌的筛选及其降解特性研究

来源 :中国农业科学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liongliong591
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为有效控制因化学农药“百菌清”大量应用而导致的农田土壤和农产品污染问题,本研究开展了该化学农药的微生物降解研究。现将对所分离到的一株对百菌清具有高效降解能力的菌株的生物学特性、降解能力、降解谱、降解中间产物等简要介绍如下:1、通过加富培养法富集、培养,从所采土样中共得到30株耐受菌株,其中菌株TP-D1可在以百菌清为唯一碳源的无机盐培养基上生长,并形成明显的降解圈。通过高效气相色谱(GC-ECD)对该菌株进行了降解能力测定,结果表明:在无机盐液体培养基中(接菌菌体终浓度为1×10~7cfu/mL),30℃,180r/min摇床上振荡培养4天,百菌清(50mg/L)的平均降解率为90.4%。2、通过形态观察、生理生化特征测定和16SrDNA序列分析,确定菌株TP-D1为苍白杆菌Ochrobactrum lupini。对生长条件的研究结果表明,该菌株的适宜生长温度为30℃,适宜pH为7.0,菌株摇瓶培养适宜的碳源为葡萄糖,有机氮源为牛肉膏,无机氮源为草酸铵,适宜的C/N为4/1。3、应用高效液相色谱(HPLC)测定了菌株TP-D1对土壤中百菌清的降解效果。结果表明所用技术体系对土壤中添加百菌清后的回收率在83.5%-101.2%,达到了农药残留提取标准要求。将菌株以10~7cfu/g土的量接种于含有50mg/L百菌清的灭菌土壤中,室温培养24小时后百菌清的平均降解率可达71.4%,第3天后达95.01%,一周后可达99.7%。4、降解谱测定结果表明,TP-D1菌株不能够降解五氯硝基苯、六六六、DDT、三唑磷、甲基对硫磷、苯胺和苯酚或降解效果不明显。5、将30℃,180r/min培养4天的培养液以正己烷∶异丙醇∶甲醇体积比5∶3∶2为展开剂,经硅胶薄层层析(TLC)分离,并收集254nm紫外光下的分离斑,以甲醇溶解和自然浓缩后,利用高效液相色谱一质谱联用技术(HPLC-MS)分析鉴定,获得两种降解产物,分别为1,3-二酰胺-四氯苯和4-羟基-三氯苯二腈(TPN-OH)。推测TP-D1通过氰基水合作用和羟基化作用两种途径降解百菌清。该研究对百菌清残留土壤和环境的生物修复具有重要意义。
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