【摘 要】
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本论文主要研究了以L-缬氨酸为原料,将其化学消旋为D,L-缬氨酸,利用菌体DLPU-zpb代谢D,L-缬氨酸中的L-缬氨酸,从而达到生产D-缬氨酸的目的。通过测定与计算消旋率,对L-缬氨酸
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本论文主要研究了以L-缬氨酸为原料,将其化学消旋为D,L-缬氨酸,利用菌体DLPU-zpb代谢D,L-缬氨酸中的L-缬氨酸,从而达到生产D-缬氨酸的目的。通过测定与计算消旋率,对L-缬氨酸的消旋条件进行优化,确定其最佳消旋条件为:醋酸浓度95%,催化剂水杨醛:氨基酸为8:1,温度90℃,反应时间1.5 h。在以上条件下消旋效果100%,经过脱色处理后D,L-缬氨酸的收率为84%。为了得到代谢L-缬氨酸能力较强的菌株,对30株菌株进行了筛选,并对最后得到的1株菌株进行了 26S rDNA(D1/D2)测序,测序结果表明该菌株为麦芽糖假丝酵母。对该菌株的培养条件进行了优化,确定最适培养条件为:培养温度30℃,pH 6.0,摇床转速 180 r/min,接菌量 4.0%。麦芽糖假丝酵母代谢L-缬氨酸的最佳条件为:反应温度30℃,摇床转速180 r/min,菌体所在培养时期为24 h,菌体浓度0.1 g/mL,反应时间4 d。经测定与计算得知L-缬氨酸的代谢率为83.6%。粗品D-缬氨酸经过脱色、浓缩、除盐后得到最终产物D-缬氨酸,以L-缬氨酸来计算其收率为34.6%。最终产物经过红外光谱分析得知其为缬氨酸,其比旋光值为负值得知产物为D-缬氨酸,经过HPLC检测得知D-缬氨酸的纯度在95%以上。
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