刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）是一种专性细胞内寄生原虫，可以感染几乎所有的温血动物，引起严重的弓形虫病症，造成新生儿流产、死胎等。弱毒活疫苗对控制弓形虫的传播有潜在价值，但报道甚少。MORN基因家族因参与速殖子细胞骨架的形成过程而发挥重要作用，是作为研制抗弓形虫弱毒活疫苗的理想候选基因。本研究的目的在于构建弓形虫MORN1与MORN2基因缺失株，阐明MORN基因家族成员的在弓形虫中的生物学功能，评价它们作为弱毒活疫苗的免疫保护力，探究其作为弱毒活疫苗的潜在价值。　　首先，为研究MORN2基因的生物学功能是否与弓形虫的毒力相关，我们利用CRISPR/Cas9技术，对弓形虫Ⅰ型RH虫株的MORN2基因进行了敲除。利用同源重组，在基因缺失处插入乙胺嘧啶药物抗性的片段DHFR。通过单克隆筛选以及PCR鉴定，成功获得MORN2基因缺失株。对该缺失株进行体外噬斑试验和体内毒力试验后，发现MORN2基因的缺失几乎不影响RH虫株在体外培养时的生长速度和对小鼠感染的毒力。因此我们认为MORN2基因的缺失不影响弓形虫RH虫株的毒力，其缺失株不具备成为弱毒疫苗的可能性。　　然后，为了研究△MORN1弱毒株作为弱毒疫苗的潜在可能性，我们又构建了△MORN1缺失株，评价了该缺失株对小鼠的毒力影响。进而以△MORN1缺失株腹腔接种昆明鼠，并在免疫后28d和70d检测相应的体液免疫和细胞免疫指标变化情况。在免疫70d后进行攻虫实验，对免疫的小鼠通过腹腔注射的方式，分别感染RH、PYS及TgC7三种不同虫株的速殖子103个（急性感染）或通过口服的万式感染PRU包囊20个（慢性感染），检测小鼠的存活时间和包囊减少率。结果表明，经△MORN1缺失株免疫的小鼠血清中抗体水平显著升高，脾细胞产生的细胞因子水平显著升高。在急性感染试验中，免疫鼠够较好地抵御RH、PYS及TgC7三种虫株的感染。在慢性感染试验中，对PRU包囊造成的慢性感染有较好的保护作用，能够有效减少小鼠脑中包囊数量。为了探究△MORN1缺失株对弓形虫垂直传播（先天性感染）的阻断效果，分别在母鼠怀孕第12天和第18天时，口服感染PRU虫株的包囊10个或者腹腔注射RH虫株速殖子200个，观察并记录仔鼠存活数和体重变化。结果显示经△MORN1缺失株免疫的母鼠能够明显地提高仔鼠的存活率及体重，同时减少仔鼠脑中包囊数量。△MORN1缺失株能够对小鼠的急性感染、慢性感染及先天性感染具有保护作用，因此有望成为防控弓形虫病的弱毒疫苗。　　综上所述，本研究通过构建弓形虫Ⅰ型RH虫株的△MORN1与△MORN2缺失株，阐明了MORN1与MORN2基因的生物学功能，进而研究了△MORN1作为弱毒疫苗的潜在价值，发现△MORN1缺失株是理想的弱毒疫苗，为弓形虫疫苗的研制与弓形虫防控奠定了基础。