活性污泥DNA提取及其微生物群落分析研究

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污水生物处理技术作为水处理中最为常用的方法,尽管已经发展成熟,但人们对于反应器内部的微生物作用原理了解得还不够透彻。这是因为,作为污水生物处理技术的核心,活性污泥中含有十分复杂的微生物体系,其群落结构或功能的变化直接影响反应器的处理能力。为了了解活性污泥中微生物群落特征与反应器性能之间的关系,进而实现对反应器的优化控制,本论文对脱氮活性污泥的DNA提取方法及其中的微生物群落进行了分析研究,得到以下结论: 1.通过对DNA提取各阶段不同方法的综合比较分析,建立了一种较为有效的活性污泥总DNA提取方法:①预处理采用化学/物理法;②细胞裂解时,采用SDS与反复冻融法相结合的方法;③去蛋白时,先用酚/氯仿抽提,离心之后再用高盐(饱和NaCl)溶液洗涤;④DNA分离采用异丙醇沉淀法;⑤对直接提取法获得的DNA样品,可采用适当稀释的办法来减少杂质的影响,提高DNA产物浓度。 2.通过对DNA样品的PCR扩增方法的比较研究,确定了一套较为有效的ERIC-PCR扩增程序:95℃2min;94℃40s,56℃ 40s,72℃ 1min,30个循环;72℃ 4min;4℃保存。 3.运用ERIC-PCR技术对三个活性污泥反应器的菌群特征进行了跟踪实验,并结合同步进行的水质测定实验,发现菌群生长情况较好时,反应器处理效果提高,反之,菌群生长情况不好时,反应器处理效果下降;同时,跟踪实验也验证了ERIC-PCR技术应用于环境样品微生物群落分析研究方面的高灵敏性和稳定性。 4.采用七种选择性培养基对反应器活性污泥的菌种进行分离培养,经观察发现,有些不同培养基上生长的菌株具有相似的形态和菌落结构。 5.对反应器活性污泥中分离出的24株菌进行镜检,发现其中17株为革兰氏阴性菌,7株为革兰氏阳性菌;其中4株为杆菌,3株为长杆菌,7株为短杆菌,10株为球菌。 6.通过反应器活性污泥的菌种筛选实验,发现异养菌的数量随时间变化逐渐减少,而其多样性却逐渐增加;同时,根据亚硝化细菌较难生长且种类较少的现象,可以初步推断亚硝化菌是制约氨氮废水脱氮的因素之一。 7.通过对分离筛选出的7株反硝化菌ZFX-1、ZFX-2、ZFX-3、ZFX-4、YFX-1,YFX-2,YFX-3进行16S rRNA序列分析,发现其中的ZFX-4菌株为门多萨假单胞菌的一株新种。
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