【摘 要】
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目的:制备抗人胰腺癌细胞单克隆抗体(McAb),并对其特性进行鉴定及进行放免显像的初步研究,为抗人胰腺癌细胞单克隆抗体在胰腺癌的早期诊断和治疗的应用奠定基础。方法:以胰腺
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目的:制备抗人胰腺癌细胞单克隆抗体(McAb),并对其特性进行鉴定及进行放免显像的初步研究,为抗人胰腺癌细胞单克隆抗体在胰腺癌的早期诊断和治疗的应用奠定基础。方法:以胰腺癌细胞系Patu8988免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,经选择培养,筛选及克隆化后,建立杂交瘤细胞系。运用ELISA方法筛选;用琼脂糖双扩散法鉴定IgG亚类;flow cytometry及免疫组化鉴定抗体组织特异性;以MTT法研究抗体对胰腺癌细胞的杀伤作用;免疫沉淀法检测该抗体所结合抗原的相对分子量;用99Tcm标记该抗体进行放免显像的实验研究。结果:经选择培养,筛选及克隆化后,得到一株能稳定分泌抗人胰腺癌细胞单克隆抗体的细胞株2F4A7(D1)。Ig类及亚类鉴定结果表明,2F4A7(D1)抗体类型为IgGI亚类,轻链为k链。间接ELISA检测腹水效价为l: 16000;流式细胞仪检测表明:该抗体与Patu8988细胞呈阳性反应(>90%),与肝癌、肾癌、胃癌、肺癌、乳腺癌呈阴性反应(<5%);MTT法示抗体对胰腺癌细胞的杀伤率明显高于对照组;单克隆抗体McAb 2F4A7(D1)与人乳腺癌组织、肝癌组织、卵巢癌组织、胃癌组织、肺癌组织以及正常胰腺组织的免疫组织化学反应结果表明,2F4A7(D1)的特异性较好;单克隆抗体McAb 2F4A7(D1)经99Tcm标记后,用于荷胰腺癌裸鼠的放射免疫定位显像。12只荷人胰腺癌裸鼠在注射人胰腺癌细胞后8周,注射部位肿瘤长至约1 cm3。尾静脉注入99Tcm标记的单克隆抗体2F4A7(D1)后2h,4h, 6h,对裸鼠进行定位显像研究,结果表明4h,时相点肿瘤部位放射性物质浓聚最明显。结论:本研究所获得的杂交瘤细胞株2F4A7(D1)分泌稳定,其分泌的单克隆抗体灵敏度高,特异性较好。该单克隆抗体的成功研制为进一步开发胰腺癌放射免疫诊断
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