猪流行性腹泻病毒(PEDV)是世界范围内导致猪只产生腹泻的主要病原体之一,尤其近十年来PEDV造成了养猪行业巨大的经济损失。PEDV对各个年龄段的猪均有很高的感染率,能够引起猪只产生腹泻、脱水等症状,尤其能够引起7日龄以下的仔猪高发病率以及高死亡率。目前对PEDV防控最有效的方式是疫苗免疫,免疫形式包括主动免疫和被动免疫。对成年猪防控PEDV的措施主要为主动免疫,对幼龄仔猪防控PEDV的方式主要为被动免疫。因此,本研究以30日龄仔猪作为研究对象,通过实验猪的主动免疫效果来筛选重组灭活疫苗佐剂的种类,探索灭活疫苗的注射剂量;以妊娠母猪及其所产仔猪作为研究对象,初步探究PEDV 15A灭活疫苗的被动免疫效果。有效的疫苗免疫后可以诱导机体产生特异性的抗体,为能够监测实验室的新型重组疫苗诱导动物机体产生特异性IgG抗体的水平,本研究首先建立了检测PEDV IgG抗体的间接ELISA方法。以原核表达并纯化的PEDV S1蛋白片段(139aa)作为包被抗原,以羊抗猪IgG-HRP作为二抗,将每步反应程序优化并进行特异性、敏感性以及重复性试验。特异性试验显示该方法对TGEV、PoRV和PDCoV常见致猪腹泻病毒的阳性血清均无交叉反应;敏感性试验显示该方法能检测到稀释800倍的PEDV IgG阳性血清;重复性试验显示不同时间包被的试剂盒检测相同样品变异系数均小于10%。为了探究本研究室研制的PEDV重组灭活苗的佐剂类型,本研究选用21只30日龄的仔猪分成6组:DMEM组(3)、氢氧化铝佐剂组(3)、201佐剂组(4)、15A佐剂组(4)、Gel 02佐剂组(4)和715佐剂组(3)。通过肌肉注射灭活苗,免疫两次,第二次与第一次间隔两周。免疫后监测各组猪只IgG抗体水平变化,发现15A佐剂组实验猪抗体水平明显高于其他佐剂组,因此选择15A佐剂用于后续研究。为了探究灭活苗制剂的剂量与IgG抗体水平之间的剂效关系,本研究选用17只30日龄的仔猪分成6组:DMEM组(2)、0.6mL制剂组(3)、1mL制剂组(3)、2mL制剂组(3)、4mL制剂组(3)和8mL制剂组(3)。通过肌肉注射,免疫两次,第二次与第一次间隔两周。免后监测各组猪只IgG抗体水平变化,发现8mL组抗体水平明显高于其他组,2mL和4mL组抗体检测也呈阳性但是值略低,0.6mL和1mL分别有1只和2只抗体检测呈阳性。因此,在实验的剂量范围内存在明显的剂效依从关系。为了评估灭活苗制剂对于初生仔猪的被动免疫保护作用,本研究选用8只妊娠母猪分成两组:免疫组(4)和未免疫组(4)分别用灭活疫苗制剂和DMEM进行了产前30天和15天的肌注免疫。产后初生仔猪采食初乳4天后,免疫组随机挑选8只仔猪作为免疫攻毒组;未免疫组随机挑选8只仔猪作为未免疫攻毒组;在免疫组和未免疫组母猪产的其他仔猪中随机挑选13只仔猪作为哺乳期间抗体水平监测组。免疫攻毒组和未免疫攻毒组同时攻入肠毒株PEDV-XS12,临床观察显示免疫攻毒组仔猪攻毒后出现腹泻,但5天内未出现死亡,剖检可见部分肠段出现病变;未免疫攻毒组仔猪攻毒后出现严重腹泻,随后很快脱水,食欲不振,精神萎靡,发病2天内全部死亡,剖检结果可见肠壁组织病变严重,小肠充气变薄。仔猪PEDV抗体检测结果显示IgG抗体水平的高低与仔猪攻毒后的状态有显著的相关性,虽然可能因为攻毒毒株毒力太强及仔猪哺乳时间较短等因素导致所有实验猪发病,但是免疫攻毒组的仔猪生理状态在攻毒早期明显好于未免疫攻毒组。说明实验室制备的PEDV灭活疫苗制剂经肌肉注射母猪能够产生较好的主动免疫效果,仔猪在采食初乳后可以呈现明显的被动免疫保护。