金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus, SA)广泛存在于空气和水中,是一种条件致病菌,可以影响鼠群繁育并对动物实验结果造成极大的干扰。因此,开发快速实验动物金黄色葡萄球菌检测技术具有较高的应用价值。环介恒温扩增方法(LAMP)能够特异、灵敏地对目的基因进行扩增,具有简便、快速和成本低廉等特点,能够满足这一需求。本研究确定了金黄色葡萄球菌的培养、菌体计数方法,并制备了金黄色葡萄球菌DNA的试剂盒提取液和热裂解法粗提提取液,分别作为LAMP检测的模板。针对金黄色葡萄球菌特异的nuc基因设计4条引物,对反应条件进行优化。通过优化,设定条件为60℃,40min,Mg2+浓度8nM,dNTP浓度2.0mM,甜菜碱浓度0.8mM时,对金黄色葡萄球菌检测限为2cfu,且与其它常见实验动物致病菌未出现交叉反应。反应结果可通过添加荧光染料SYBR Green Ⅰ直接肉眼观察。利用设计的金黄色葡萄球菌LAMP法引物,分别对金黄色葡萄球菌ATCC25923以及本实验室分离、保藏的金黄色葡萄球菌、沙门菌、小肠结肠炎耶尔森菌、假结核耶尔森菌、肺炎克雷伯菌进行扩增。琼脂糖凝胶电泳显示,只有金黄色葡萄球菌ATCC25923和本实验室保藏的金黄色葡萄球菌地方分离株扩增结果呈阳性。进一步证明了nuc基因的特异性,说明nuc基因可以作为检测金黄色葡萄球菌的可靠靶序列。本研究建立的金黄色葡萄球菌LAMP方法具有快速、灵敏、操作简单、设备要求低的特点,不仅可以应用于实验动物的金黄色葡萄球菌检测,同样适用于食品、临床感染金黄色葡萄球菌的检测和诊断,能够满足基层、大批量样本、快速检测的要求。