论文部分内容阅读
目的孕期肥胖导致许多妊娠期并发症和胎儿不良出生结局的发生,具有近期和远期不良后果,病理发生与母体和胎盘炎症的改变有关。二十二碳六烯酸(DHA)具有明确的抗炎作用,其通过自身和代谢物调控炎性因子水平。本次实验建立肥胖小鼠模型并受孕,予以不同剂量的DHA处理,观察母体和胎盘组织病理变化,检测血浆和胎盘组织中炎症水平,验证DHA通过GPR120-NF-κB/NLRP3调控肥胖孕鼠胎盘炎症的假设。方法选择4周龄C57BL/6J雌鼠按照完全随机分组原则分为正常对照组(CON)和高脂饲料喂养(HFD)组。喂养9周后HFD组根据体重状况,筛选出肥胖组,所有小鼠按1:2(♂:♀)合笼,受孕成功后对照组继续普通饲料喂养,肥胖组孕鼠随机分为四组继续高脂饲料喂养并从孕中期开始予以相应剂量的DHA,分别为肥胖模型(HCD)组、低剂量DHA干预(HCD-LD)组(52mg/kg,以DHA含量计算)、中剂量DHA干预(HCD-MD)组(104mg/kg)、高剂量DHA干预(HCD-HD组)组(208mg/kg)。喂养期间定时称量各组小鼠的饲料摄入量和体重,GD17晚8:00禁食不禁水,GD18早晨测定空腹血糖后,腹腔给与10%水合氯醛注射麻醉孕鼠,取血分离血浆并测定炎性因子水平,解剖分离肝脏称量后取部分OTC包埋和4%多聚甲醛固定;剥离胎盘胎鼠并称量,胎盘部分用4%多聚甲醛固定其余冻存用于实时荧光定量PCR及蛋白免疫印迹测定。结果孕早期HCD组及各剂量组孕期增重均高于对照组(p<0.01);孕中、晚期和整个孕期孕鼠增重差异无统计学意义(p>0.05);与对照组相比,HCD组肝脏重量显著增加(p<0.01);各剂量组相较于HCD组呈下降趋势,差异无统计学意义(p>0.05);HCD组孕鼠肝组织病理切片可见大量脂滴积累和炎性细胞,DHA干预后HCD-HD组明显减少,且肝组织结构趋于正常。油红O染色切片显示,对照组有些着色的脂滴,而HCD组肝细胞呈明显红染,中、高剂量组脂滴显著减少。HCD组孕鼠血浆IL-1β和TNF-α水平明显高于CON组;中、高剂量组IL-1β水平明显降低(P<0.05,P<0.01),TNF-α水平高剂量组降低(P<0.01)。HCD组胎鼠体重和胎体比(胎鼠体重/胎盘重)显著降低(P<0.01),中、高剂量组相较于HCD组显著升高(P<0.01);不同组胎盘直径没有明显差异。与CON组相比,HCD组TG、TC、LDL水平均高于对照组(P<0.05),HDL水平降低(P<0.05);与HCD组比较,中、高剂量组TC水平降低(P<0.01),LDL水平HCD-HD组出现下降,TG水平HCD-LD组即开始降低(P<0.05),HDL水平无显著性差异(P>0.05)。胎盘组织HE染色显示HCD组胎盘充血明显并有大量炎性细胞浸润,HCD-HD组改善明显。HCD组CD36、FATP-4和FABP-pm m RNA和蛋白水平均受到显著抑制(p<0.01),HCD-HD组CD36 m RNA水平明显上调(p<0.01),各剂量组FATP-4m RNA水平有上升趋势,但差异不具有统计学意义;HCD-MD组FABP-pm开始出现上调(p<0.01);与HCD组相比,HCD-LD组CD36、FABP-pm(p<0.01)、中、高剂量组FATP-4蛋白表达上调明显(p<0.05)。HCD组孕鼠胎盘组织GPR120基因和蛋白表达无明显变化,与HCD组相比,HCD-HD组m RNA水平明显升高(P<0.05),蛋白表达HCD-LD组开始上调(P<0.05)。HCD组NF-κB、IKK和IκB m RNA均显著高于CON组(P<0.01),HCD-LD组NF-κB和IκB开始出现下调,IKK HCD-MD组开始出现下调(P<0.05)。HCD组核NF-κB和总蛋白中p-IκB蛋白表达显著升高,HCD-HD组核内NF-κB显著降低(P<0.01);HCD-MD组P-IκB呈现明显降低(P<0.01)。HCD组胎盘总蛋白IκB(P<0.01)和胞质NF-κB(P<0.05)表达降低,中、高剂量组蛋白表达上调。HCD组NLRP3、Caspase-1 m RNA和蛋白水平均有升高(P<0.01),HCD-LD组NLRP3和中、高剂量组Caspase-1基因表达开始下调(P<0.01)。NLRP3蛋白表达随着DHA干预浓度升高逐渐降低(P<0.01),Caspase-1蛋白表达水平HCD-HD组明显降低。HCD组胎盘组织IL-1β(P<0.01)、TNF-α(P<0.05)和IL-6(P<0.01)m RNA水平显著上调;与HCD组相比,HCD-LD组IL-1β、HCD-MD组IL-6m RNA水平开始出现下调(P<0.01);TNF-αm RNA水平各处理组有下降趋势,但差异未有显著性(P>0.05);HCD组IL-1β和TNF-α蛋白表达升高(P<0.01),各剂量组IL-1β蛋白表达水平有下降趋势(P>0.05);中、高剂量组TNF-α蛋白表达明显下降(P<0.01)。结论肥胖孕鼠出现母胎循环中促炎细胞因子升高并伴有胎盘炎症等病理变化,孕期给与DHA干预可以改善胎盘炎症状况,影响子代出生结局。调控的可能途径是DHA通过激活胎盘上的GPR120受体抑制NLRP3炎症小体的活化并下调NF-κB信号通路,抑制了胎盘炎症水平的升高。