1.研究目的 通过体内外实验研究,了解加味四逆散抗HBV和DHBV 3TC耐药株的作用,以及对免疫性肝损伤的抗炎、抗脂质过氧化作用,以期探索加味四逆散治疗慢性乙型肝炎及抑制免疫性肝损伤的作用机制和靶点,为临床广泛应用提供科学的依据。 2.实验内容 2.1 四逆散加减方体内抗DHBV的实验研究 2.2 加味四逆散体内抗DHBV的实验研究 2.3 DHBV 3TC耐药株的检测 2.4 加味四逆散体内抗DHBV 3TC耐药株的实验研究 2.5 加味四逆散体外抗HBV的实验研究 2.6 加味四逆散对小鼠的急性毒性试验 2.7 加味四逆散对ConA所致免疫性肝损伤小鼠的保护作用 2.8 加味四逆散对BCG+LPS所致免疫性肝损伤小鼠的保护作用 3.实验方法 3.1 将先天感染鸭随机分为5组,每组6只。分别为病毒对照组,3TC组,原方组,加味组,去枳组。各组中药醇提物均以20g·kg^-1·d^1-灌胃;3TC按200mg·kg^-1d^-1灌胃,共10d。对照组未做处理。分别于T0、T5、T10、P3各时间点采血,分离血清,用斑点杂交法测定血清中DHBV的载量变化。 3.2 将先天感染鸭随机分为5组,每组6只。分别为病毒对照组,3TC组,加味四逆散大,中,小剂量组。加味四逆散醇提物分别以20g·kg^-1·d^-1、10·kg^-1·d^-1、5g·kg^-1·d^-1灌胃;3TC按200mg·kg^-1d^-1灌胃,共10d。对照组未做处理。分别于T0、T5、T10、P3各时间点采血,分离血清,用斑点杂交法测定血清中DHBV的载量变化。 3.3 3份DHBV阳性血清分别取自2只先天携带DHBV的广东麻鸭和3TC耐药的广州麻鸭。提取DHBV DNA。使用一对扩增DHBV DNA全基因序列的引物,用PCR法扩增全基因序列,取PCR产物10μl进行0.8%琼脂糖凝胶电泳,紫外线检测仪下观测结果。 3.4 1日龄广州麻鸭,足静脉注射DHBV DNA 3TC耐药株血清,斑点杂交筛选出后天感染DHBV者作为实验动物。动物感染毒种13天后,随机分为6组,每组5-6只。分别为病毒对照组,3TC组,ADV组,加味四逆散大,中,小剂量组。加味四逆散醇提物分别以20g·kg^-1·d^-1、10·kg^-1.d^-1、5g·kg^-1·d^-1灌胃;3TC按200mg·kg^-1·d^-1灌胃,