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植物在生长发育过程中会不断的受到生物和非生物的胁迫，制约植物的正常生长。植物抵御外界伤害的途径有很多种，其中ABA所介导的抗氧化防护途径尤为重要。ABA诱导NADPH氧化酶基因表达量上升，进而导致活性氧（如H2O2）的产生，ZmMPK5在此信号通路中发挥了重要的作用。本实验室前人研究发现，作为一种转录因子，ZmWRKY4参与了ZmMPK5调节的抗氧化防护，且在整个过程中起着重要的作用，同时通过酵母双杂交和BiFC证明了ZmWRKY4与ZmMPK5存在相互作用。为了进一步验证ZmWRKY4与ZmMPK5相互作用的真实性，本实验以玉米为研究对象，利用免疫共沉淀(Co-IP)、His-Pull down、体外磷酸化研究ZmWRKY4与ZmMPK5的相互作用。同时研究了ZmWRKY4在ABA信号通路中对H2O2的影响以及与ZmMPK5的上下游关系。 将构建好的ZmWRKY4-his和ZmMPK5-myc真核表达载体共同转化玉米原生质体，进行免疫共沉淀反应，检测到ZmWRKY4与ZmMPK5在体内存在相互作用。纯化His-ZmWRKY4蛋白进行His-Pull down，结果显示ZmWRKY4与ZmMPK5在体外也存在相互作用。同时，利用凝胶激酶反应分析ZmWRKY4是ZmMPK5的一种磷酸化底物。由此可以说明ZmWRKY4与ZmMPK5存在相互作用。 外源H2O2处理玉米幼苗，经过荧光定量PCR分析，发现ZmWRKY4基因表达量在30min和90min出现峰值;用H2O2抑制剂和清除剂预处理后再用ABA处理幼苗，发现与对照相比ZmWRKY4基因表达量没有上升。将构建好的ZmWRKY4-YFP转化玉米原生质体，原生质体内的H2O2增多，ABA处理后效果更加明显。利用RNA干扰技术沉默ZmWRKY4基因，发现原生质体内的H2O2减少，ABA处理后亦不能扭转这一反应。ZmWRKY4-YFP转化玉米原生质体后，经过荧光定量PCR分析，NADPH氧化酶基因表达量上升，沉默Zm WRK Y4后NADPH氧化酶基因表达量下降。说明H2O2在ZmWRKY4参与的ABA信号通路中起着重要的作用。 利用共同转化原生质体的方法，发现过表达ZmMPK5、沉默ZmWRKY4后H2O2积累、抗氧化防护酶SOD和APX活性以及基因SOD4和cAPX表达量均下降，相反过表达Zm WRKY4、沉默ZmMPK5后H2O2积累、抗氧化防护酶SOD和APX活性以及基因SOD4和cAPX表达量均上升。说明在ABA诱导的抗氧化防护途径中ZmMPK5基因位于ZmWRKY4的上游。