研究背景:急性肝衰竭是一种以短期内严重肝功能损害及大量肝细胞坏死为特点的临床重症,自然死亡率高达90%。肝脏内过激的免疫炎症反应是肝细胞损伤发生的重要病理机制,中性粒细胞作为先天性免疫反应重要的效应细胞值得探讨。肝移植是目前治疗急性肝衰竭最有效的手段,但存在供体来源短缺、手术费用昂贵、术后需终身服用免疫抑制剂等缺陷。间充质干细胞(MSCs)由于具有低免疫原性、免疫调节、炎性趋化、组织修复等生物学特性被认为是抗炎性损伤和组织修复中最具应用前景的干细胞。近年来MSCs移植对急性肝衰竭的治疗作用得到越来越多研究的关注,然而其对受损肝组织的修复机制目前尚未建立统一认识。研究发现,MSCs在体外可调控中性粒细胞的吞噬和氧化爆发,后者在体内介导的级联炎性效应可能成为MSCs治疗急性肝衰竭的潜在机制。高迁移率蛋白1(HMGB1)可作为晚期炎症介质参与机体炎症反应,其在受损组织的表达水平与靶向募集的中性粒细胞水平常呈一致性,而HMGB1的表达及释放被认为与NF-κB的核内易位紧密关联。综上,NF-κB-HMGB1通路介导的中性粒细胞募集可作为研究MSCs治疗急性肝衰竭机制中的潜在靶点。研究目的:1.观察MSCs移植对D-氨基半乳糖/脂多糖联合诱导的Wistar大鼠急性肝衰竭模型的治疗作用并探索中性粒细胞在其中的关联机制。2.探索NF-κB-HMGB1信号通路在MSCs调节中性粒细胞的肝向归巢和活化中的作用。3.评价MSCs移植联合抗中性粒细胞血清对急性肝衰竭的治疗效果。研究方法:使用6-8周龄Wistar大鼠建立D-氨基半乳糖和脂多糖联合诱导的急性肝衰竭模型;观察造模后大鼠外周血及肝脏中性粒细胞水平变化;分离并培养大鼠原代骨髓MSCs,经大鼠尾静脉移植MSCs,观察其治疗效果及对中性粒细胞数量和活化水平的调控作用;分别利用重组HMGB1、HMGB1抑制剂、NF-κB抑制剂干预NF-κB-HMGB1信号通路,观察该通路在中性粒细胞调控中的作用,通过免疫荧光、Western Blot和实时荧光定量PCR等分子生物学手段分析相关的分子机制改变;评估MSCs移植联合抗中性粒细胞血清对急性肝衰竭大鼠的治疗作用。研究结果:1.D-氨基半乳糖/脂多糖诱导大鼠急性肝衰竭后外周血及肝脏内中性粒细胞明显增多,其变化趋势与肝功能水平呈现一致性。2.MSCs移植能够减轻D-氨基半乳糖/脂多糖诱导的急性肝衰竭,下调大鼠外周血及肝脏内中性粒细胞的数量和活化水平。3.HMGB1具有促进中性粒细胞募集和活化的作用,干预HMGB1可明显减轻中性粒细胞相关的肝损伤。4.MSCs移植可下调HMGB1、NF-κB表达水平,干预NF-κB-HMGB1信号通路能够影响中性粒细胞在受损肝组织的募集和活化。5.MSCs移植联合抗中性粒细胞血清治疗急性肝衰竭较单一 MSCs治疗呈现出更好的治疗效果。研究结论:1.在D-氨基半乳糖/脂多糖联合诱导的Wistar大鼠急性肝衰竭模型中,MSCs移植能够减少外周血及肝脏内中性粒细胞的数量及活化程度,减轻大鼠肝损伤。2.MSCs移植可下调NF-κB-HMGB1信号通路,该通路可能是MSCs调控肝衰竭大鼠肝脏内中性粒细胞数量和活性的潜在机制。3.MSCs移植联合抗中性粒细胞血清较单一 MSCs移植治疗可更好调控肝脏炎症微环境,具有更好治疗效果。