辣木叶水提取物抑制p38 MAPK信号通路治疗牙周炎的实验研究

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目的:体内体外实验探究辣木叶水提取物对实验性牙周炎的影响及其作用机制。方法:1.采用水提取法提取辣木叶,并确定其营养成分及含量。2.建立大鼠牙周炎模型,随机分为3组,分别为疾病对照组(Control)、低剂量实验组(0.5g/kg BW)、高剂量实验组(1g/kg BW),每组10只,建模后隔日进行灌胃处理;每日灌胃连续4周后处死,苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法观察药物对各脏器毒性影响及牙周组织炎症细胞浸润情况;通过Micro-CT评估牙槽骨吸收情况;Elisa法检测大鼠血清中OPG/RANKL及相关炎症因子表达。3.培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7并用辣木叶水提取物处理;CCK8法检测细胞增殖活性;加入1μg/ml Pg.LPS刺激RAW264.7细胞后随机分为4组,分别为对照组(Control)、辣木叶水提取物组(200μg/ml、400μg/ml、800μg/ml),作用24h后,实时荧光定量PCR检测细胞中OPG/RANKL及炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-1Ra、IL-10相对表达量;Western Blot法检测p38,p-p38,OPG/RANKL的表达水平。结果:1.辣木叶水提取物中多酚、黄酮含量较高,并表现出较强的抗氧化性;辣木叶提取物体内毒性微小并且它在低浓度时对巨噬细胞无毒性影响。2.骨保护作用:药物处理后牙槽骨吸收明显减少;体内体外实验中OPG/RANKL表达均呈现骨吸收抑制水平。3.抗炎作用:药物处理后牙周组织中炎症细胞浸润减少;大鼠血清及细胞中促炎因子IL-1β、IL-6、TNF-α表达水平下调,抗炎因子IL-1Ra、IL-10表达水平上调。4.细胞模型经药物处理后,p-p38/p38蛋白表达水平比率下调,OPG/RANKL蛋白表达水平比率上调。结论:一定浓度范围内辣木叶水提取物体内体外均无毒副作用,具有一定生物安全性。辣木叶水提取物能通过抑制p38 MAPK信号通路、增加OPG/RANKL比率,抑制实验性牙周炎进展。
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