喉癌是头颈部常见恶性肿瘤之一，其常规治疗方法为手术加放疗或化疗，但无论何种方法，都无法达到满意的疗效。光动力疗法（Photodynamic therapy, PDT）是近十年来新兴的恶性肿瘤治疗方法，具有微创、副作用小并可与其它疗法合用等优点。1994年，光动力治疗用药新光敏素Ⅱ在加拿大被批准上市，标志着PDT正式成为手术、放疗、化疗之后的第4种成熟的肿瘤治疗方法。这种治疗方法是指对人体施用某种可定位于肿瘤细胞的光敏物质，然后以一定波长的光局部照射激活该物质，引发一系列的光化学和光生物学进程，导致肿瘤细胞不可逆的光损伤。放射治疗是喉癌的标准治疗方法之一。但目前放疗仅对早期喉癌有相对较好的疗效，对广泛浸润性生长或复发肿瘤疗效欠佳。半个世纪前,GaryLH等经深入研究首次提出肿瘤乏氧细胞是严重影响放疗效果的重要原因。随后,大量的体内外研究都证实,乏氧细胞需要约相当于正常细胞3倍剂量的辐射才能被杀死。这就导致临床治疗中不可避免地提高放射剂量，但过大剂量有可能造成正常组织的损伤；而且，有15%的喉癌患者对放疗具有抵抗性。因此，放射增敏便成为近些年来研究的热点之一。金丝桃素（Hypericin, HY）是近年来应用于光动力疗法的新型光敏剂，具有抗炎、抗病毒、抗肿瘤、增强免疫力等活性，其特征为470nm处高吸收和大量单线态氧的产生。因此，以金丝桃素为光敏剂行PDT疗法治疗喉癌从理论上推断，具有一定的可行性和优势。目前，光动力疗法由于光源的波长穿透力有限（一般在1cm左右），因此，对于巨大的实体肿瘤疗<WP=81>效差。喉以软骨为支架，间以肌肉、韧带、纤维组织及黏膜等构成的锥型管腔状器官。因此，喉的各个解剖部位相对体积较小，光源的穿透力相对较高。喉癌以声门上型、声门型较为常见，并且喉癌多见表面癌肿呈菜花样改变，癌肿体积的最小径线往往小于1cm或在1cm左右，一般能够满足光源的照射要求。喉居颈前正中，舌骨下方，上接喉咽，下接气管。纤维喉镜或其它光导纤维可经口或经鼻直接达到喉腔，不仅可以在直视下进行诊断，还可以配合激光输送适合PDT的光源，因此，PDT法在喉癌的治疗中具有可行性。早在1975年，学者们就发现光敏剂血卟啉衍生物（HPD）对放疗有增敏作用。而金丝桃素的生物学活性明显高于HPD，因此，金丝桃素能否同样作为放射增敏剂提高放疗的效果，值得探讨，而且，PDT与放疗联合应用，可以提高疗效，如果一种药即可作为光敏剂、又可作为放射增敏剂，那麽，必然可以提高疗效，并同时缩短治疗时间，减少药物的副作用。因此，本文研究金丝桃素对人喉鳞状细胞癌株Hep-2的作用，以探讨金丝桃素在喉癌治疗中应用的可能性。实验方法：取体外培养的喉癌细胞Hep-2，设空白对照组，在Hep-2细胞中加入金丝桃素后，共分为4组：光照组和非光照组，放射组和非放射组。其中光照组分别加入终浓度为0.5、1.0、2.0、3.0、5.0μg/ml的金丝桃素，加药１ h后给予光照。照射时间为10 min，其照射能量为7.5J/cm2。非光照组培养板分别加入终浓度为5.0、10.0、20.0、25.0μg/ml的金丝桃素。细胞处理后置于培养箱中避光培养48 h。采用形态学研究、荧光显微镜技术、MTT法以及流式细胞仪技术进行检测。放射组加入终浓度为1.0、2.0、3.0μg/ml的金丝桃素。加药后一小时给予5Gy剂量X线照射。照射后，置于培养箱避光培养48小时。非放射组加入终浓度为5.0、10.0、20.0、25.0μg/ml的金丝桃素。加药后，置于<WP=82>培养箱避光培养48小时。采用形态学研究、MTT法以及流式细胞仪技术进行检测。结果：正常对照组细胞贴壁生长，胞浆无颗粒，细胞呈梭型或多角型，细胞生长密集，彼此接触，可见增殖分化的圆形细胞。在光照组，小剂量金丝桃素组就可见细胞数量减少，并可见一定数量的细胞肿胀；随着剂量的增加，细胞数量明显减少，在高剂量组可见绝大部分细胞已呈坏死碎片。MTT结果显示，光活化金丝桃素后，对喉癌细胞的生长具有明显的抑制作用，并且呈剂量依赖性增加。流式细胞仪分析结果表明，光照组G0/G1期细胞比例高于正常对照组，S期细胞比例低于对照组。光照组的细胞凋亡率高达21.76%，明显高于正常对照组及非光照组。流式细胞仪分析图表明，正常对照组有少量细胞凋亡；在G1峰前出现一小的亚二倍体凋亡峰，金丝桃素光照组有较多细胞凋亡，在G1峰前出现十分明显的亚二倍体凋亡峰。吖啶橙染色后在荧光显微镜下见正常细胞呈均匀一致的翠绿色，金丝桃素光照组可见有细胞胞膜出芽、染色质凝集、核片段化及凋亡小体等典型的细胞凋亡特征。在非光照组，细胞数量及形态上与对照组比无明显变化。MTT结果未能显示单纯应用金丝桃素对Hep-2细胞具有抑制作用。流式细胞仪测量结果表明，非光照组的细胞凋亡率为12.52%，在G1峰前出现比较明显的亚二倍体凋亡峰。在放射组，放射对照细胞组细胞数量略为减少，细胞明显肿胀。小剂量金丝桃素就呈现出放射增敏作用：细胞数量减少，细胞明显肿胀，随着剂量的增加，细胞数量明显减少，在高剂量组可见绝大部分细胞已呈坏死碎片。MTT结果显示金丝桃素放射对喉癌细胞的生长具有明显的抑制作用，并且小剂量与高剂量的抑制效果相近，呈现出平台?