【摘 要】
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干细胞(HSC)移植是治疗白血病和淋巴瘤等恶性肿瘤、代谢性和严重自身免疫性疾病及先天性免疫缺陷等严重危害人类健康疾病的最有效方法之一。脐带血(UCB)是继骨髓(BM)和动员外
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干细胞(HSC)移植是治疗白血病和淋巴瘤等恶性肿瘤、代谢性和严重自身免疫性疾病及先天性免疫缺陷等严重危害人类健康疾病的最有效方法之一。脐带血(UCB)是继骨髓(BM)和动员外周血(MPB)之后又一HSC的来源，我们国家由于计划生育的实行和经济文化等原因，短时间内组织大规模无关供者骨髓库比较困难，因此我国UCB在HSC移植中具有尤为广泛的发展前景。UCB具有很高的增殖和扩增潜能等诸多优点，但是单份标本所含的细胞数有限，这大大限制了其在临床的广泛应用。体外扩增是解决UCB这一缺陷的重要方法，因而优化UCB造血干／祖细胞(HSPCs)的体外扩增方案极为迫切。 体外扩增的HSPCs是否具有临床应用价值取决于两个方面：其一，细胞保持增殖和自我更新的能力；其二，细胞保持向BM微环境归巢功能的完整。许多扩增方案研究的重点是保持UCB原始细胞的增殖和自我更新能力，而进一步动态观察UCB HSPC在扩增过程中归巢相关功能的研究则鲜有报道。 本实验室建立了一个具有临床应用前景的无血清无基质悬浮扩增体系：无血清培养基QBSF-60+FST(FL、SCF和TPO)，这一体系可支持以CD34~+细胞为靶细胞的UCB各阶段HSPCs高效扩增，而且对从扩增产物中再次纯化CD34~+细胞体外生物学特征的研究表明：该扩增体系可使HSPC保持长期重建造血的潜能。AC133~+细胞是一个新的HSPC群体，有人认为它可能比CD34~+细胞更为原始，近来有关的研究引起人们的广泛关注。在此基础之上，本论文第一部分旨在探讨AC133~+细胞在已建立的体外培养体系中的扩增情况，动态观察AC133／CD34细胞亚群在扩增过程中免疫表型的变化，探讨两种HSPC表面抗原间的内在联系。端粒长度和端粒酶活性是衡量细胞自我更新能力的重要指标，当端粒长度缩短至一定程度时，细胞便丢失其增殖和自我更新能力。本研究用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)的方法检测了UCB CD34~+细胞体外扩增前后端
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