沙枣提取物抗肿瘤活性筛选及其机制研究

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目的:筛选沙枣不同分离组分的抗氧化活性,研究各组分对人肝癌Bel-7404细胞、人肝癌HepG-2细胞、人肺癌A549细胞、人食管癌ECA-109细胞、人胃癌SGC-7901细胞,人宫颈癌Siha细胞等6种细胞的增殖和凋亡的影响,并从分子水平研究沙枣提取物抗肿瘤分子机制,建立总酚与抗肿瘤活性之间的相关性。方法:1)以没食子酸为对照品,采用Folin-Ciocalteu法测定沙枣各分离组分的总酚含量。2)以抗坏血酸作为阳性对照,通过检测铁离子还原能力,羟基自由基清除能力,DPPH·清除能力等3种方法观察各组分抗氧化活性。3)通过MTT法,观察各组分对6种肿瘤细胞增殖抑制作用。4)选取MR-20组分,设低(50μg/mL)、中(100μg/mL)、高(150μg/mL)剂量组,采用AinexinV-FITC/PI双染法,流式细胞仪检测其诱导6种肿瘤细胞凋亡,并采用Hoechst 33258荧光染色法观察5种肿瘤细胞核形态变化。5)采用罗丹明123染色法,以顺铂作为对照,观察MR-20组分对Siha细胞线粒体膜电位的影响。PI染色法观察MR-20组分对siha细胞周期的影响,通过RT-PCR法观察其对细胞周期调控基因CyclinB1,CyclinE和细胞自噬相关基因LC3B,Beclin1表达水平的影响;通过Western blot法观察MR-20组分对细胞周期调控蛋白CyclinB1,CyclinE,P21和细胞自噬相关蛋白Beclin1表达水平的影响。结果:1)沙枣不同分离组分具有不同的抗氧化活性,其抗氧化活性与组分中所含总酚类成分的含量相关,活性最强的MR-20组分中总酚含量最高。2)沙枣各分离组分对6种肿瘤细胞增殖有不同的抑制作用,其中对Siha细胞的增殖抑制活性最强;作用最强的组分为MR-20组分,干预72 h后,MR-20组分对Siha细胞增殖抑制的IC50值为56.2μg/mL。MR-20组分的3个剂量组对6种细胞均有诱导凋亡作用,其早期凋亡细胞率比空白高。各组分总酚浓度越高,凋亡率也越高。3)组分MR-20处理Siha细胞后,细胞线粒体膜电位下降,细胞周期G2期阻滞,周期调控基因CyclinB1,CyclinE表达水平下调(P<0.05),细胞自噬相关基因LC3B,Beclin1表达水平下调(P<0.05);细胞周期调控蛋白CyclinB1,CyclinE表达水平下调,P21蛋白表达水平上调(P<0.05),细胞自噬相关蛋白Beclin1表达水平下调(P<0.05)。结论:沙枣总酚具有抗氧化活性,可不同程度抑制肿瘤细胞增殖,诱导其凋亡,沙枣总酚通过诱导细胞发生周期阻滞,其机制可能是上调P21表达,下调CyclinB1,CyclinE表达有关。
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