微量细胞基因组DNA大规模甲基化分析技术的研究

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肿瘤和发育生物学研究的重要组成部分——DNA甲基化分析,可以帮助我们了解肿瘤的发生和发育中细胞的分化和基因的时序表达。传统的甲基化分析方法需要大量的DNA模板,这对于研究一些功能重要,但是数量稀少且散在分布的细胞产生了很大的限制。因此,亟需建立一种高灵敏度,高通量,低成本的DNA甲基化分析技术手段。 本文将论述基于亚硫酸盐修饰后测序(BSP)的方法,针对微量DNA模板,进行甲基化状态的检测方案。根据起始模板量的不同,分别运用多重PCR和全基因组扩增技术,建立起一套稳定的大规模分析微量细胞甲基化状态的技术。对于1000个细胞的微量DNA,通过凝胶包埋梯度细胞结合亚硫酸盐处理后PCR的实验,和对多重PCR的条件改进,可以将甲基化分析的通量增加到5—10个基因/1000个细胞。对于2500-5000个细胞的DNA,通过对全基因组扩增技术的探索,将其应用到对亚硫酸盐处理后模板的扩增中,实现了样本量的放大,以利于后续的甲基化分析。 通过以上实验,建立起稳定的,高灵敏度和高通量的微量细胞甲基化分析技术,必将为大规模分析微量细胞的DNA甲基化状态,以及DNA甲基化的功能研究提供更加便利的条件。
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