光谱法和色谱法测定植物样品中巯基化合物的研究

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半胱氨酸和含半胱氨酸残基的巯基化合物(以下简称巯基化合物)在生物体内具有重要的生物学功能,大多分布在植物细胞质内。巯基化合物,像GSH和Cys等,在机体内的含量是重要的健康因子。研究表明;机体衰老和特定的疾病会降低整体巯基化合物的含量分布。因此,通过筛选富含巯基化合物的药食两用植物作为外源性补充剂来提高机体巯基化合物的含量分布是防病、治病、延年益寿的重要途径之一。迄今,尽管有许多测定植物样品中的巯基化合物的测定方法的报道,但前处理方法和测定方法的不同导致测定结果有较大差异,同时也有因所选方法不当引起的漏检导致许多样品尚缺少巯基化合物含量测定的分析数据[2-3]。这对筛选富含巯基化合物的药食两用植物及其生物功能成分的评价带来较多的困难。本研究选择用细胞破壁、衍生化为一体的同步衍生化的前处理方法,采用高效液相色谱法和光谱法测定了莲子和枳椇子巯基化合物,同时对方法学和前处理过程对测定的影响一并进行了探讨。本研究筛选富含巯基化合物的药食两用植物的筛选及其应用、巯基化合物在特定植物中的生物学功能的评价都具有实际意义。高效液相色谱法测定莲子中GSH和总巯基(-SH)的含量利用DTNB为衍生化试剂,采用细胞破壁、衍生化为一体的同步衍生化前处理方法,测定了莲子中GSH和总巯基(-SH)的含量。迄今,利用DTNB柱前衍生化HPLC法测定GSH等小分子巯基化合物含量有许多文献报道,但测定总巯基含量鲜见有报道。这是因为与总巯基含量信息有关的衍生化产物TNBA在色谱测定过程中易发生化学变性导致的色谱峰拖尾,导致不能对总巯基含量进行准确的定量分析。本研究中,通过改变流动相的酸度和相对极性的方法采用梯度洗脱的方法,对色谱条件进行了优化,成功消除了色谱拖尾、准确测定了莲子中的总巯基含量。测定结果表明;莲子中GSH和总巯基的含量分别为0.9711μmol/g和1.3686μmol/g是一种富含巯基化合物的药食两用植物。光谱法测定莲子中GSH和总巯基(-SH)含量采用细胞破壁、衍生化为一体的同步衍生化的前处理方法,利用DTNB衍生化UV-Vis分光光度法和OPA衍生化荧光分光光度法测定了莲子中总巯基和GSH含量。莲子中GSH的含量为0.9443-0.9576μmol/g;总巯基的含量为1.3267-1.3452μmol/g。测定结果与HPLC法测定结果进行比对发现两者结果基本吻合。光谱法测定枳棋子中GSH和总巯基的含量利用衍生化试剂4,4’-二硫代联吡啶(4-DPS)和邻苯二甲醛(OPA)分别采用UV-Vis分光光度法和荧光分光光度法测定枳棋子中GSH和总巯基的含量。枳棋子中总巯基和GSH含量分别为0.08401-0.08582μmol/g和2.391-2.462μmo]/g,测定方法的回收率达101.72%和99.25%,其检测限分别为0.02377μmol/L和0.03641μmol/L。
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