膜片钳技术与血清药理学结合研究川芎对猪冠状动脉平滑肌BKca通道的作用

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目的:大电导钙激活钾通道(BKCa通道)广泛存在于血管平滑肌,其开放使K+外流增加,细胞膜超极化,引起电压依赖性钙通道关闭,减少胞外Ca2+内流,降低胞内Ca2+浓度,从而引起血管舒张;反之,血管收缩,可见BKCa在调节血管舒缩过程中起着重要作用。川芎是活血化瘀类中药,虽然对其扩冠作用及机制已有些研究,但由于实验条件的限制,在对其扩血管机制的研究中,通常只观察了有效成分单体如川芎嗪(Tetramethylpyrazine,TMP)、川芎素(SodiumFerulic,SF)的作用,这使得对川芎的研究在体外与实际应用时的体内结果不具有同一性。中药血清药理学是近十余年发展起来的一种新型方法学,它既排除了传统中药体外实验中中药粗制剂本身的理化性质对实验的干扰,又能反映药物在体内的生物转化过程及其作用结果,与传统的中药药理体外实验相比更科学、更客观。本实验把血清药理学方法与膜片钳技术相结合,以川芎有效成分川芎嗪为对照,通过观察动物灌胃川芎药液后分离的血清(以下简称含川芎血清)对BKCa的作用,并用HPLC法检测血清中川芎嗪含量,同时通过观察含川芎血清和川芎嗪对离体猪冠状动脉血管条的影响作平行比较分析,旨在从细胞水平和分子水平阐明川芎扩冠机制,也为探索建立血清药理学与膜片钳技术结合于中药研究的联合技术奠定基础。 结论:含川芎血清在细胞贴附式和内面向外式膜片上对猪冠状动脉平滑肌细胞BKCa通道无激活作用,此与血清中川芎嗪含量低有关,也表明鼠灌胃川芎药液后没有可激活BKCa的内生性活性成分生成。空白血清对BKCa通道也无明显作用。在内面向外式膜片上,川芎嗪对BKCa通道具有激活作用,这种激活作用与Ca2+的存在与否无明显关系;川芎嗪具有舒张高钾(45mM)去极化所致的冠脉血管条收缩的作用,含川芎血清和鼠空白血清无此作用,此结果与膜片钳实验一致。   
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