背景与目的:恶性肿瘤的发病率近年来逐渐上升,严重威胁人体的生命和健康。虽然对癌症的治疗有手术,放化疗以及靶向治疗等方法,但都有其固有的局限性。因此,寻找新的稳定作用靶位,开发特异性杀伤肿瘤细胞的新型药物具有重要的临床意义。肿瘤内皮细胞标志分子1(TEM1)可在近乎所有实体瘤特别是卵巢癌相关细胞中大量表达,而在正常细胞中不表达或者表达水平很低。因此,TEM1可以作为肿瘤血管治疗的标志物。本实验室在前期研究中利用酵母抗体库筛选分离出了可同时结合人类和鼠类TEM1的高亲和力、特异性单链抗体(sc Fv T18)。本研究中,我们主要利用单链抗体sc Fv T18选择性携带凋亡诱导因子AIF,靶向抑杀TEM1阳性细胞,从而为Aif-T18融合蛋白在肿瘤治疗中的开发应用提供实验依据。方法:通过基因工程技术构建p IRES-TEM1-EGFP重组质粒,转染TEM1阴性细胞MS1并利用G418筛选出TEM1阳性细胞系(MS1-TEM1);构建p ET302-Aif和p ET302-Aif-T18(将sc Fv T18基因与AIF基因融合)重组质粒,转化到表达宿主菌BL21中,IPTG诱导得到所需的目的蛋白,之后利用流式细胞技术和MTT检测融合蛋白对MS1和MS1-TEM1细胞的亲和力以及杀伤效果。结果:成功构建了MS1-TEM1稳定细胞系,细胞流式结果显示:Aif-T18对MS1-TEM1细胞具有较强的结合能力,靶向性良好;MTT结果显示72 h后,Aif-T18对MS1-TEM1细胞具有很好的杀伤效果。结论:我们通过原核表达系统得到的Aif-T18融合蛋白对MS1-TEM1细胞具有明显的特异性杀伤效果,有望开发成为一种新型的抗肿瘤药物。