基于PLC-TRPV1通路研究艾灸干预IBS内脏痛的作用机制

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目的:在IBS内脏痛小鼠模型上,探讨不同温度艾灸缓解内脏痛效应是否与其影响结肠组织TRPV1表达有关,研究结肠TRPV1表达量与内脏痛之间的关系;进一步探讨艾灸调节PLC-TRPV1通路异常影响结肠TRPV1的表达的作用机制。方法:实验一:不同温度艾灸对IBS内脏痛的影响32只8周龄雄性C57BL/6 SPF级小鼠,按体重随机分为正常组、模型组、(45±1)℃组、(38±1)℃组,每组8只。采用TNBS灌肠制备IBS内脏痛小鼠模型,经28天造模后,对(45±1)℃组、(38±1)℃组小鼠连续艾灸后三里穴7天,在红外热像仪下监测温度。观察艾灸干预各组小鼠AWR评分;并采用免疫组化、Western blot法检测各组小鼠结肠组织中TRPV1蛋白的相对表达含量。实验二:基于PLC-TRPV1通路研究(45±1)℃艾灸对IBS内脏痛的作用机制40只8周龄雄性C57BL/6 SPF级小鼠,按体重随机分为正常组、模型组、(45±1)℃组、阻断组、阻断+(45±1)℃组,每组8只。采用TNBS灌肠制备IBS内脏痛小鼠模型,经28天造模后,对阻断组小鼠腹腔注射TRPV1阻断剂BCTC(0.06mg/次,1次/日),连续干预7天;(45±1)℃组小鼠,连续艾灸后三里穴10min/次,1次/日,干预7天;阻断+(45±1)℃组小鼠,腹腔注射TRPV1阻断剂BCTC,0.06mg/次;注射35min后,在红外热像仪监测下对后三里穴10min/次,1次/日连续干预7天。进行干预前后小鼠AWR评分;并分别采用免疫组化法检测各组小鼠结肠组织PLCβ1、PIP2、DAG、PKCε、TRPV1表达;ELISA法检测DAG含量;Western blot法检测PLCβ1、PIP2、PKCε、TRPV1表达。结果:1、(45±1)℃艾灸可以明显降低结肠组织TRPV1蛋白的异常高表达,从而有效降低IBS内脏痛小鼠AWR评分。2、(45±1)℃组、阻断+(45±1)℃组均可明显降低IBS内脏痛小鼠结肠组织PLC-TRPV1信号通路中PLCβ1、PIP2、DAG、PKCε、TRPV1异常高表达,而阻断组仅降低TRPV1蛋白的异常高表达。结论:1.结肠组织TRPV1蛋白的过高表达是引起IBS内脏痛重要环节之一。(45±1)℃温和灸可能通过降低结肠上皮中TRPV1蛋白的异常表达,从而缓解IBS小鼠内脏痛。2.(45±1)℃温和灸可能是通过调节PLC-TRPV1信号通路,抑制结肠组织TRPV1异常表达,进而达到缓解IBS内脏痛之效应。
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