【研究背景和目的】心肌缺血再灌注（myocardial ischemia/reperfusion injury,MIRI）损伤是指缺血缺氧的心肌恢复正常的灌注后,心肌组织损伤反而变得更加严重的病理过程。在心肌缺血再灌注损伤的发生发展过程中氧化应激反应起着非常重要的作用,而过量活性氧自由基（reactive oxygen species,ROS）的产生将会引起心肌更加严重的损伤。研究表明Keap1是心肌缺血再灌注损伤（MIRI）后减轻心肌损伤、改善心功能的重要的调控因子之一。我们前期在心肌缺血再灌注模型的研究中发现泛素特异性蛋白酶7表达明显增高,并且Keap1（Kelch样ECH关联蛋白1）在氧化应激损伤及ROS的生成中有着重要的作用,但其对缺血后再灌注损伤的调控机制尚未明确。本研究旨在探讨USP7通过介导Keap1的表达来调控ROS的产生及对缺血再灌注机制的探讨及研究。【研究方法】1.利用左冠状动脉前降支（Left anterior descending,LAD）结扎缺血后松开线结,构建小鼠心肌缺血再灌注损伤模型。2.采用P5091注入动物体内抑制USP7的活性、sh RNA心肌注射干扰USP7的表达,研究小鼠心脏凋亡相关蛋白表达。3.采用TUNEL技术检测心脏组织凋亡的情况及结果。4.采用酶联免疫吸附测定法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测心脏损伤因子的表达。5.采用TTC技术检测小鼠心脏梗死面积。6.采用超声技术观察术后小鼠心功能变化情况。7.采用免疫共沉淀技术,研究USP7与Keap1的相互作用。【研究结果】1.USP7在心肌梗死组织中表达增加:在小鼠建立急性心肌梗死模型1小时及6小时后取出心脏组织用Western blot法检测USP7蛋白表达量。结果显示模型组中小鼠USP7表达量明显升高。2.USP7在心肌缺血再灌注损伤心肌中表达增加:在小鼠建立急性心肌缺血再灌注模型后取出心脏组织用Western blot法、RT-q PCR法、免疫组化检测USP7蛋白表达量。结果显示模型组中USP7表达量明显升高。3.抑制USP7可减轻心肌凋亡蛋白的表达:小鼠经腹腔注射P5091（USP7特异性抑制剂）及心脏点状注射腺病毒相关病毒后构建心肌缺血再灌注模型,用Western blot法检测心肌USP7及促凋亡蛋白BAX的表达量。结果显示,抑制了USP7的心脏组织中USP7及BAX蛋白表达量明显降低。4.抑制USP7可减轻心脏组织的细胞凋亡:小鼠经腹腔注射P5091及心脏点状注射腺病毒相关病毒后构建心肌缺血再灌注模型,用TUNEL法检测心肌细胞的凋亡程度。结果显示,抑制了USP7后心脏组织中凋亡细胞量明显减少。5.抑制USP7可改善心脏功能:小鼠经腹腔注射P5091及心脏点状注射腺病毒相关病毒后构建心肌缺血再灌注模型,在模型建立成功后第3、14、21天用VEVO2100超声多普勒检测小鼠心脏功能的变化,结果显示抑制了USP7后小鼠心脏功能的变化随着时间的推移而得到改善。6.抑制USP7可减少心肌损伤引起的梗死面积扩大及纤维化:小鼠经腹腔注射P5091后构建心肌缺血再灌注模型,用EVAN-TTC双染色法、Masson染色检测小鼠心脏梗死面积及纤维化程度。ELISA法检测血清中CTNT（肌钙蛋白T）CKMB（肌酸激酶同工酶）的含量。结果显示抑制了USP7后小鼠心脏梗死面积及纤维化程度明显减少,血清CTNT及CKMB的含量明显降低。7.USP7与Keap1存在相互作用并能够促进Keap1的降解:小鼠经腹腔注射P5091及心脏点状注射腺病毒相关病毒后构建心肌缺血再灌注模型,术后取材用CO-IP及Western blot法检测USP7及Keap1蛋白表达的水平,Western blot法检测泛素（Ub）和Keap1蛋白表达水平,结果显示抑制USP7后使Keap1泛素化水平增加,加速其降解。8.抑制USP7能减少ROS的含量:小鼠经腹腔注射P5091后构建心肌缺血再灌注模型,术后心脏组织制备成单细胞悬液,用流式细胞术检测ROS的含量,结果显示抑制USP7后心脏组织的ROS含量明显减少。【结论】抑制去泛素化酶USP7可促进Keap1的降解从而减轻心肌缺血再灌注引起的损伤