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背景与目的:淀粉样β蛋白(Aβ)与淀粉样β蛋白结合乙醇脱氢酶(ABAD)结合诱导线粒体功能障碍产生氧化应激是阿尔茨海默病(AD)发病的主要机制之一。坡垒酚甲(Hopeahainol A)是从我国海南特有植物坡垒树(拉丁学名:Hopea hainanensis)中分离纯化的一种天然多酚类化合物。前期试验表明坡垒酚甲在AD模型中具有强抗氧化作用和脑保护作用。因此,我们拟在探索坡垒酚甲是否通过抑制Ap与ABAD结合从而抑制Aβ诱导的线粒体功能障碍,减少氧化应激,最终治疗AD。
方法:本研究分为体内研究和体外研究两部分。体内研究采用双转基因APP/PS1小鼠(8个月),体外研究对象为Aβ1-42处理原代培养皮层神经元(24小时),然后采用坡垒酚甲干预。1)在体内外用分光光度计法检测坡垒酚甲处理前后线粒体复合物IV、ABAD和Caspase3活性,并采用Western blot检测细胞色素C的释放情况。2)采用免疫共沉淀法和免疫荧光显微镜检测坡垒酚甲处理前后Aβ1-42处理原代培养皮层神经元中Aβ1-42与ABAD结合和共表达分布情况变化。3)采用高效液相法测量坡垒酚甲在加入Aβ1-42前后含量变化从而检测坡垒酚甲与Aβ1-42的结合情况并采用计算机模拟计算二者结合位点。
结果:1)坡垒酚甲能有效抑制Aβ诱导的线粒体功能障碍。2)坡垒酚甲能抑制Aβ与ABAD结合。3)坡垒酚甲通过与AβC端丙氨酸(Ala42)形成氢键从而竞争性抑制Aβ与ABAD结合。
结论:坡垒酚甲可通过与ABAD竞争性结合Aβ,抑制Aβ与ABAD结合,从而减少Aβ诱导的线粒体功能障碍。