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龙牙百合(Lilium brownii var.viridulum Baker)是百合科(Liliaceae)百合属(Lilium)多年生草本植物,其食用部分是地下鳞茎,药食同源,有较高的营养价值和保健作用。百合病毒病是造成品种退化、产量降低、品质下降的主要原因之一,目前尚无有效药剂防治病毒病,最方便可靠的措施是通过茎尖培养,生产脱毒种球。龙牙百合具有休眠的特性,在以鳞茎作种球进行大田生产时,休眠程度影响着田间出苗的早晚、出苗率、整齐度、植株的长势和产量等;在以鳞茎作加工原料时,休眠的解除又会造成水分和养分的大量消耗,以至于丧失应用价值。因此,开展本项目的研究,对鳞茎的储藏保鲜、加工和脱毒种球的生产、推广应用等均具有十分重要的意义。以龙牙百合鳞茎为材料,采用植物组织培养技术研究了高温、病毒化学抑制剂等预处理对其茎尖存活率和脱毒效果的影响以及脱毒鳞茎快速繁殖的途径。采用分光光度法、高效液相色谱、聚丙烯酰胺凝胶电泳、IEF-SDS双向电泳、细胞化学和透射电子显微镜等技术,研究了低温贮藏解除休眠过程中碳水化合物、蛋白质、核酸、内源激素等含量和同工酶、蛋白质组分、Ca2+-ATPase分布以及茎尖超微结构的动态变化。结果表明:茎尖分生组织的大小与脱毒率呈负相关,高温对病毒的抑制作用依次为CMV、LRV、TBV、LSV;一定浓度的病毒唑可有效的使病毒钝化,提高脱毒率,小苗的茎尖较小鳞茎的茎尖容易去除病毒,2种或3种脱毒技术的组合是生产龙牙百合脱毒种球的首选方法。龙牙百合体细胞胚发生的重要调节因素是2,4-D,其形态学发育过程与合子胚相似,依次经过球形胚,心形胚,鱼雷胚,成熟胚等阶段,形成再生植株。在低温贮藏过程中,鳞茎的淀粉含量呈逐渐下降的变化,而可溶性糖和可溶性蛋白含量则呈明显上升趋势,淀粉分解产生的糖类为鳞茎解除休眠及萌发后茎尖的生长发育提供了物质和能量基础;RNA含量呈抛物线的变化趋势,而DNA含量变化不明显。GA3与IAA含量以及GA3/ABA、IAA/ABA的比值呈明显上升趋势,ABA含量总体呈下降趋势,内源激素的变化和平衡与休眠解除有关,休眠的解除可能为GA3类促进物质和ABA类抑制物质相互作用所致。鳞叶中过氧化物酶(POD)同工酶酶带较多,且在40d后陆续有新的条带出现;淀粉磷酸化酶(PHO)同工酶条带较少,只在第60d有一新条带的出现;酯酶(EST)同工酶在第30d后有新的条带出现,且活性也逐渐增强,表明休眠的解除过程一直伴随着新同工酶的出现和活性强弱的变化。鳞茎低分子量蛋白含量丰富,21kD和23kD两个蛋白组分表达优势明显,是其主要的蛋白组分,检测到3类低温贮藏过程中变化的蛋白(多肽),其中有一类是新出现的多肽,说明休眠的解除不但有蛋白质表达丰度强弱的变化,更有新蛋白的参与。生长点线粒体膜和质膜上的Ca2+-ATPaSe活性分别在第30d时和第40d时达最高,而液泡膜上的只在第50d时才出现,核仁和染色质部位的Ca2+-ATPase活性在细胞分裂时最高;30d时可观察到细胞核体积增大,线粒体数量及内部的管泡状嵴以及脂体和内质网增多,液泡由大逐渐裂解成数量较多的小液泡,造粉质体向前质体逐渐转变,这些Ca2+-ATPase时空分布和超微结构规律性的变化,可作为形态学上解除休眠开始的指标。