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目前,利用诱导型和组织特异性启动子,人工构建复合式启动子,来代替天然的组成型启动子,从而避免外源基因在受体植物中非特异性的持续、高效表达已经得到广泛共识.但是比较理想的、真正能应用于生产实际的组织特异性启动子不多,诱导型启动子更少.该文对山葡萄ClassⅢ几丁质酶基因VCH3启动子进行了系列片段缺失,系统研究了VCH3启动子在转基因烟草NC89中表达的诱导活性及组织特异性,主要结果如下:1.采用PCR方法对VCH3启动子进行了系列片段缺失,利用农杆菌介导的叶盘转化法对构建的启动子缺失片段::GUS嵌合基因转化了烟草NC89,并对水杨酸(SA)处理后的转基因烟草进行了GUS活性的荧光检测,结果表明最长的启动子片段(-1189~+7,含有两个SA顺式作用元件)驱动了最强的GUS酶活性,相当于次长片段的2倍.转VCH3(-589)GUS和VCH3(-892)GUS(均含有一个SA顺式作用元件)嵌合基因的烟草根系中的GUS酶活性基本一致.VCH3(-276)GUS(无SA顺式作用元件)嵌合基因驱动的GUS酶活性最低,仅仅稍高于对照.2.利用点突变技术突变了VCH3启动子中的两个SA顺式作用元件,同突变前一样将突变后的VCH3启动子进行系列片段缺失,转化烟草,并测定SA处理后的转基因烟草的GUS荧光活性,结果为:只含有突变的SA顺式作用元件的VCH3<*>(-589)GUS、VCH3<*>(-892)GUS和VCH3<*>(-1187Ⅱ)GUS(两个SA顺式作用元件均被突变)嵌合基因驱动的GUS酶活性依次渐高,但相差不多,与突变前的VCH3(-276)GUS处于同一个数量级.VCH3<*>(-1187Ⅰ)GUS(突变一个SA顺式作用元件,保留一个完整的SA顺式作用元件)片段驱动了较强的GUS酶活性,但强度仅与突变前只含有一个SA顺式作用元件的VCH3(-589)GUS和VCH3(-892)GUS片段相近.以上的结果表明SA顺式作用元件对外源施加的SA有应答效应,并且GUS活性的最大量表达需要两个SA顺式作用元件的协同作用.3.通过对SA处理后的转基因烟草根系进行的GUS活性组织化学分析,结果发现,无论在突变前后,横切面还是纵切面,各缺失片段驱动的GUS活性在维管组织中表达最强,在外皮层及内皮层中表达较弱.从染色深浅上来看,含有两个完整的SA顺式作用元件的VCH3(-1187)GUS嵌合基因的转基因烟草根系颜色最深,含一个完整的SA顺式作用元件的VCH3(-589)GUS、VCH3(-892)GUS和VCH3<*>(-1187Ⅰ)GUS片段的次之,只含有突变了的SA顺式作用元件的VCH3<*>(-589)GUS、VCH3<*>(-892)GUS和VCH3<*>(-1187Ⅱ)GUS片段以及没有SA顺式作用元件的VCH3(-276)GUS和VCH3<*>(-276)GUS片段颜色较弱.组织化学分析结果表明VCH3启动子受SA诱导在雏管组织中特异表达,诱导活性与SA顺式作用元件的个数成正比,并且SA诱导的VCH3启动子维管组织特异性表达元件可能位于-276bp~+7bp之间.