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生长激素(growth hormone,GH)是由垂体前叶分泌的单链多肽激素,广泛存在于脊椎动物。GH具有促进动物生长发育,提高产乳量、产毛量、提高饲料转化率和瘦肉率等重要功能。牦牛是青藏高原特有的畜种之一,是当地牧民主要的生产与生活资料,是经过长期自然选育和人工选育而成的畜种。牦牛生产水平低,年产乳量在450公斤左右,成年体重210-270kg。基于生长激素的促生长作用,有必要对牦牛生长激素基因进行研究。本研究采用RT-PCR方法,设计特异性引物,从牦牛脑垂体中扩增出707bp的核苷酸序列,包括牦牛生长激素(Yak growth hormone,YGH)基因完整的编码区,长654bp,编码217个氨基酸(GeneBank Accession No. EF154193)。序列分析表明:牦牛生长激素基因氨基酸序列与黄牛、山羊、绵羊、马、猪、猫和犬的同源性分别为100%、99.1%、98.6%、88.9%、88.5%、88.9%和89.4%,表明生长激素基因在进化上非常保守;YGH基因有两个明显的疏水区域,存在两个强跨膜螺旋,存在信号肽,是一种分泌型蛋白质;二级结构主要以α-螺旋和不规则卷曲为主,三级结构预测结果包含第28-215氨基酸残基,与二级结构预测结果一致;对YGH蛋白抗原表位预测表明该蛋白有较高的抗原指数、较多的抗原表位。利用克隆的牦牛生长激素基因编码区序列设计包含酶切位点的特异性引物,将PCR扩增出的目的片段与表达载体PET-28a(+)连接,构建了原核表达载体PET-28a(+)/YGH,在大肠杆菌BL21(DE3)plysS中表达。经IPTG诱导后收集菌体进行SDS-PAGE电泳分析。优化表达条件并大量表达后纯化融合蛋白,Western blotting鉴定其抗原性。结果表明:重组蛋白主要以包涵体形式存在, IPTG终浓度为1.0mM,40℃诱导5h后融合蛋白的表达量最高;Western blotting显示该融合蛋白具有良好的抗原反应性。