论文部分内容阅读
目的:睡眠-觉醒周期是最重要的生物节律的表现形式,而睡眠障碍是帕金森病(PD)最常见的非运动症状之一,并且在晚期患者中尤为明显。另外,晚期PD患者对多巴胺治疗的反应性、体温、心率、血压、激素水平等也存在节律性的紊乱。这提示我们,在晚期PD患者中存在明显的生物节律改变,但这种生物节律的恶化是疾病本身进展导致?亦或是长期左旋多巴(L-DOPA)治疗的影响?本文旨在探讨长期L-DOPA用药对PD大鼠模型生物节律的影响。方法:采用双侧纹状体6-羟基多巴(6-OHDA)立体定位注射的PD大鼠模型,造模21天后,随机分为三组,分别腹腔注射L-DOPA和等体积的生理盐水:(1)sham组(n=20,生理盐水造模,生理盐水治疗);(2)6-OHDA组(n=20,6-OHDA造模,生理盐水治疗);(3)L-DOPA组(n=20,6-OHDA造模,L-DOPA治疗)。连续治疗21天,于第40天起通过转棒实验、旷场实验、跨步实验等方法观察行为学改善情况。于第43天6:00、12:00、18:00、24:00四个时间点收取脑及肝脏组织,通过实时定量PCR(QPCR)检测下丘脑视交叉上核(SCN)、纹状体、皮层、肝脏相关时钟基因Clock、Bmal1、Per2、Rorα的mRNA水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆褪黑素和糖皮质激素水平;高效液相色谱法(HPLC)检测纹状体中DA、DOPAC、5-HIAA水平;免疫印迹(WB)检测纹状体TH蛋白表达量和皮层及纹状体内D1、D2受体。结果:长期L-DOPA治疗改善了6-OHDA大鼠模型的跨步、旷场实验运动能力(P<0.01,P<0.001)。L-DOPA治疗后,SCN区Bmal1表达水平与6-OHDA组相比在12:00(P<0.01)与24:00(P<0.001)时间点下降。纹状体中,Bmal1、Rorα在18:00时表达量较6-OHDA组低(P<0.05),且L-DOPA治疗后将Per2的高峰相位推迟至24:00。但在皮层中,给予L-DOPA后Clock振幅及波动性全天明显增强。在外周组织肝脏中,L-DOPA对时钟基因表达的影响较6-OHDA组无明显变化(P>0.05)。同时,L-DOPA治疗后,糖皮质激素分泌量较6-OHDA组增加(P>0.05),褪黑素的分泌在6:00更明显地受到了抑制(P<0.01)。6-OHDA造模后,纹状体中D2受体表达水平下降(P<0.05),皮层中D1受体表达无明显变化(P>0.05),L-DOPA治疗对多巴胺受体表达量无明显改变(P>0.05)。结论:6-OHDA造模的PD动物模型中存在生物节律的改变,且长期L-DOPA治疗后进一步抑制了中枢SCN、纹状体中时钟基因Bmal1等的表达,而皮层中Clock振幅增加,其作用机制可能与L-DOPA治疗后分别激活皮层及纹状体中多巴胺D1、D2受体有关。同时,褪黑素、糖皮质激素产生相位变化,神经递质分泌也受影响,因此,L-DOPA治疗反而加重了晚期PD生物节律的恶化。