许多转抗虫基因作物表达Bt杀虫蛋白已经被广泛应用于提高作物性状,例如玉米和棉花。然而对于转Bt基因水稻商业化种植生产,人们一直争论Bt蛋白在水稻种子中表达是否安全这个问题。同时随着越来越多的转Bt基因植物种植,并且多为转单一Bt毒素蛋白基因,昆虫抗性问题日益突出。针对以上问题,本项实验研究采用绿色组织特异表达和融合抗虫基因方法。构建两个转化载体pGreen-CrylAc-223和pZmUbi-CrylAc-223,将crylAc基因和223因融合在一起形成crylAc-22(?)3杭虫基因,分别采用pGreen绿色组织特异启动子和ZmUbi启动子来指导融合抗虫基因表达,以抗草甘膦基因G10作为筛选标记,对比研究pGreen启动子的特异性和促进基因表达能力。农杆菌介导转化方法获得抗虫抗草甘膦的转基因水稻株系。在温室中,利用棉铃虫对转基因水稻进行抗虫生物测定,获得转融合抗虫基因水稻阳性株系。对阳性株系草甘膦活性测定,结果发现转基因水稻有很好的抗性。利用western blot分析来比较pGreen启动子和ZmUbi启动子驱动融合基因表达能力,证实携带pGreen启动子水稻株系融合基因只在绿色组织中特异表达,而在种子中几乎检测不到,低于17ng/g。对转基因水稻进行田间评估和southern blot分析,鉴定得到单拷贝,结合农艺性状分析选取优秀株系S20,借助Tail-PCR和普通PCR方法确定T-DNA插入位点。在田间实验条件下,利用水稻二化螟和稻纵卷叶螟进行抗虫生物测定,结果显示转基因水稻株系S20具有很好的抗虫性能。喷施草甘膦,挑选S20株系纯和植株,为培育水稻新品种和进一步研究提供材料。