茶多糖的分离纯化及其抗凝血活性研究

来源 :安徽工程大学 | 被引量 : 13次 | 上传用户:zwb20042002
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茶多糖通常是一类糖复合物,其一条或多条碳链通过N-或O-与多肽链共价连接。报道显示多糖具有多种生物学活性,如抗氧化、降血糖和增强免疫等生物活性,本论文通过对茶多糖提取、脱蛋白、分离纯化、结构表征和抗凝血活性研究,尝试筛选出一种具有潜在医药价值的天然抗凝血多糖,其研究的主要结果如下:1.茶多糖的提取及其优化采用水提法从茶叶中提取粗多糖,采用响应面Box-Behnken实验设计方法对提取时间、液固比和提取温度进行优化从而获得最佳的多糖提取工艺,采用多元回归分析对实验数据进行拟合对并其进行统计学方差分析,得最佳提取条件如下:提取时间106min,液固比30,提取温度64℃,在此优化条件下,粗多糖得率为13.26%,与预测值13.14%非常接近。2.茶多糖的脱蛋白通过对Sevag法、三氯乙酸法和聚酰胺法进行对比,得出聚酰胺法不但脱蛋白效果最好,而且多糖损失最小,静态和动态聚酰胺脱蛋白相比,两者蛋白去除率和脱色率相近,但动态脱蛋白的多糖损失比静态大。相对而言,静态聚酰胺脱蛋白效果更好,其结果是蛋白去除率和多糖保留率分别为88.8%和90.3%。3.茶多糖的分离纯化利用阴离子交换柱DEAE sepharose CL-6B分离纯化茶多糖,分别用磷酸缓冲液、0.1、0.2和0.5mol/L的NaCl进行洗脱,经浓缩、透析和冷冻干燥得到四个主要组分,分别为TPS-1、TPS-2、TPS-3和TPS-4,得率分别为13.4%、27.4%、15.9%和17.1%。其中TPS-1为中性多糖,而TPS-2、TPS-3和TPS-4为酸性多糖。4.茶多糖的结构表征茶多糖紫外光谱显示TPS-4在260和280nlml处有显著的吸收峰,表明TPS-4含有蛋白质和核酸,而TPS-1、TPS-2和TPS-3则没有吸收峰。傅立叶变换红外光谱显示茶多糖组分具有典型的多糖谱图特征。TPS-1、TPS-2、TPS-3的凝胶渗透色谱图为单一峰,显示其为均一性多糖,其分子量分别为20760、24230和250643Da,而TPS-4含有2个组分,为非均一性多糖,其分子量分别为689113和4150Da。多糖组分经三氟乙酸水解后进行高效阴离子液相色谱检测,分析结果显示TPS-1主要含有阿拉伯糖,半乳糖,葡萄糖,甘露糖;TPS-2主要含有鼠李糖,阿拉伯糖,半乳糖,半乳糖醛酸,葡萄糖醛酸;TPS-3和TPS-4单糖组分基本相似,主要含有鼠李糖,阿拉伯糖,半乳糖,葡萄糖,半乳糖醛酸,葡萄糖醛酸。5.茶多糖的体外抗凝血活性用医学上经典的APTT.PT和TT三项指标来考察茶多糖的抗凝血活性,同时分别用生理盐水和肝素钠作为阴性和阳性对照,所有多糖组分都可以延长APTT时间,并在实验范围内存在一定的剂量依赖关系。TPS-4的抗凝血活性比肝素钠弱,但TPS-4比TPS-1、TPS-2和TPS-3抗凝血活性强,且对APTT表现出显著性影响(P<0.05),TPS-1和TPS-4能够延长TT时间,而多糖组分在PT实验中却没有统计学意义,结果显示TPS-4是通过内源性和把纤维蛋白原转化为纤维蛋白来影响凝血途径。
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