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环境内分泌干扰物（Environmental Endocrine Disruptors，EEDs）指的是那些能潜在的干扰内分泌系统的功能,干扰机体的内稳态以及调节生长、发育等激素的合成、释放、转运、代谢、结合、活化（灭活）的一类外源性化合物。多氯联苯（Polychlorinated, PCBs）和有机氯农药滴滴涕（dichlorodiphenyl trichloroethane,DDT）广泛存在于自然界当中，而PCB153作为PCB的主要同系物，p,p’-DDE作为DDT的主要代谢产物，两者亲脂性强且均可通过食物链在人和动物机体内大量富集，而发挥毒效应，可严重影响人体健康或对后代产生不良的长远影响。随着科学研究的不断发展，对细胞信号转导通路的研究也是不断深入，EEDs对细胞信号转导通路，特别是丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated proteinkinase，MAPK）信号转导通路，引起了人们大量的关注。JNK信号转导通路主要受炎症刺激产生的细胞因子和外界环境刺激，与细胞周期性阻滞、细胞坏死、等有关。Frigo等的研究则发现，MAPK信号转导通路可被有机氯农药引起的应激所激活，活化AP-1，进而使细胞的一些主要功能得到相应的调节。垂体作为下丘脑-垂体-甲状腺轴的一个重要组成部分，对维持该轴的动态稳定有着十分重要的作用。因此，在过去研究的基础上，本实验试以PCB153、p,p’-DDE为受试物，垂体细胞为靶细胞，为解释其对JNK/MAPK信号转导通路的影响，毒作用机制提供科学的依据。第一部分:大鼠垂体细胞的离体培养及PCB-153、p,p’-DDE单独及联合作用对垂体细胞活力的影响目的：探讨PCB-153、p,p’-DDE单独及联合作用对大鼠垂体细胞活力的影响，并且找出适宜的毒作用剂量。方法：分离取出垂体并进行体外细胞培养，再用浓度为PCB-153：1、5、25、125μmol/L，p,p’-DDE：10、30、50、70μmol/L染毒48h后用MTT比色法测定它们在490nm的吸光度值；在单独作用的基础上，将PCB-153， p,p’-DDE两者按1+10、5+30、25+50、125+70μmol/L配制成为混合溶液，并对细胞染毒，在490nm处用MTT比色法测定它们的吸光度值。结果：PCB-153、 p,p’-DDE单独及其联合染毒作用于垂体细胞48h后，垂体细胞的吸光度值随着浓度的增加呈现出一种降低的趋势；PCB-153, p,p’-DDE单独作用，分别在125μmol/L，70μmol/L剂量组时明显低于溶剂对照组（P<0.05），25+50μmol/L联合染毒组也明显低于与溶剂对照组（P<0.05），其他剂量组没有差异。结论：PCB-153、 p,p’-DDE浓度分别高于25μmol/L，50μmol/L时，对垂体细胞的活力影响较大，可能会对细胞的正常形态、基本功能产生影响；PCB-153、p,p’-DDE联合染毒对垂体细胞活性的影响大于两者单独染毒的影响，这说明两种毒物联合染毒具有一定的协同作用。第二部分: PCB-153、p,p’-DDE单独及联合作用对垂体细胞ASK-1、MKK7、JNK、c-jun基因表达情况的影响目的：测定PCB-153、p,p’-DDE各剂量组单独及联合作用于大鼠垂体细胞后ASK-1、MKK7、 JNK、c-jun基因的水平，探讨其对JNK/MAPK信号转导通路的影响。方法：用Trizol提取垂体细胞总RNA，实时荧光定量PCR方法检测原代培养大鼠垂体细胞ASK-1、MKK7、 JNK、c-jun的基因水平。结果：PCB-153、p,p’-DDE单独及联合作用于大鼠垂体细胞48h后，ASK-1基因除两单独低剂量组外，均呈现出抑制状态；MKK7基因p,p’-DDE各剂量组与对照组比较均有统计学意义，PCB-153高剂量组有统计学意义，联合组与对照组和两毒物单独作用的各剂量组比较，结果均有统计学意义；随着各自染毒剂量组浓度的增加，JNK的mRNA表达水平也逐渐升高，JNK除p,p’-DDE低剂量组与对照组比较无统计学意义之外，其余各组均有显著性差异，且高剂量联合组与两单独组比较也有显著性差异；c-jun基因p,p’-DDE高剂量组与PCB-153及联合作用各剂量组，同对照组的比较均有统计学意义，且三个联合染毒组与相应剂量组的PCB-153、p,p’-DDE单独染毒时相比，垂体细胞中c-jun基因的表达均比单独染毒时有所升高，差异具有统计学意义。析因设计的方差分析显示除JNK低中剂量组外，其余各组均有明显的交互作用。结论：ASK-1出现抑制状态说明可能是由于在该浓度毒物作用下，同时有抗凋亡的信号被代偿性激活，使得该基因表达呈现抑制状态。随着各自染毒剂量组浓度的增加MKK7，JNK，c-jun mRNA表达水平逐渐升高，这表明PCB-153，p,p’-DDE及其联合作用可能激活了JNK信号转导通路。