人Th17细胞的表型、功能特征及其与白色念珠菌感染的关系的研究

来源 :中山大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:b411574103
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本论文的第一部分,我们运用RT-PCR、ELISA、ELISPOT和流式细胞术全面系统地研究了正常人外周血单个核细胞(PBMCs)中Th17细胞的表型及功能特征,主要研究PBMCs在不同的多克隆刺激剂刺激后产生IL-17的量,产生IL-17的T细胞亚群的频率,IL-17与Th1/Th2型细胞因子的关系,Th17细胞与Treg细胞的关系,Th17细胞的表型如记忆细胞标志、活化标志和趋化因子表达情况等。同时我们还对纯化的CD4+T细胞中IL-17 mRNA和IL-17的表达进行了研究。结果表明,多克隆刺激剂anti-CD3加anti-CD28 mAb单克隆抗体(anti-CD3+anti-CD28 mAb)或PMA+Ionomycin刺激后,正常人PBMCs中IL-17mRNA的表达大大增强,并产生大量的IL-17,与刺激剂anti-CD3+anti-CD28 mAb相比,PMA+Ionomycin刺激产生的IL-17的量更大。同时,ELISPOT的结果显示,在anti-CD3+anti-CD28 mAb刺激后,106 PBMCs中平均有114个细胞产生IL-17。产生IL-17的T细胞亚群分析显示IL-17主要由CD4+T细胞所产生,其阳性频率在anti-CD3+anti-CD28 mAb和PMA+Ionomycin刺激后分别为0.53±0.29%和1.63±0.72%,表达IL-17的CD8+T细胞的频率在两种刺激剂刺激后均较低,分别为0.11±0.05%和0.11±0.07%。而且多克隆刺激剂在转录及蛋白水平直接诱导纯化的CD4+T细胞产生了大量的IL-17,从而证实了正常人PBMCs中存在一群对多克隆刺激剂应答的Th17细胞。表型分析发现Th17细胞表达CD45RO、CD69及趋化因子受体CCR6和CCR4,不表达CD45RA,部分表达CCR7,细胞呈现活化记忆细胞的表型,而且部分细胞为中央性记忆细胞。在对IL-17和Th1/Th2型细胞因子的关系的研究中发现,anti-CD34+anti-CD28 mAb刺激后,大约有10%产生IL-17的CD4+T细胞表达IFN-γ,30%产生IL-17的CD4+T细胞表达IL-2,但IL-17几乎不与Th2型细胞因子共表达。对比分析CD4+IL-17+T细胞和CD4+CD25high调节性T细胞(Treg)中Foxp3和CTLA4的表达情况,结果表明,CD4+IL-17+T细胞和CD4+CD25high Treg细胞都高表达CTLA4,但只有CD4+CD25high Treg细胞表达Foxp3,说明Th17细胞不同于Treg细胞。 本论文的第二部分我们首先研究了正常人PBMCs中白色念珠菌特异性的Th17细胞。运用RT-PCR、ELISA、ELISPOT和流式细胞术等实验手段,我们主要研究了PBMCs在热灭活的白色念珠菌的孢子或菌丝刺激后产生IL-17的量,产生IL-17的阳性细胞频率等。结果表明,白色念珠菌的孢子和菌丝刺激均可大大增加PBMCs中IL-17 mRNA的表达,ELISA检测细胞培养上清液中的IL-17得到了类似的结果。同样,ELISPOT的结果显示,白色念珠菌的孢子或菌丝刺激后,106PBMCs中平均大约有18个细胞产生IL-17。而且,流式细胞术分析表明,白色念珠菌的孢子或菌丝刺激PBMCs后,尽管阳性频率不高,但大多数正常人PBMCs中都能检测到产生IL-17的CD4+T细胞,揭示正常人PBMCs中存在一群白色念珠菌特异性的Th17细胞。随后,我们以正常人和白色念珠菌感染者为研究对象,对比分析了二者PBMCs在白色念珠菌刺激后产生IL-17的量,Th17细胞的频率和抗原特异性Th17细胞的表型。结果显示,白色念珠菌感染者的PBMCs在白色念珠菌刺激后产生更高的IL-17,抗原特异性的Th17细胞的频率也高于正常对照,但二者的Th17细胞都呈现记忆细胞的表型。 综上所述,我们的研究证实正常人PBMCs中存在一群记忆性Th17细胞,Th17细胞与Th1/Th2细胞及Treg细胞不同。同时发现部分记忆性Th17细胞是白色念珠菌特异性的,白色念珠菌感染者的PBMCs在白色念珠菌刺激后产生更高的IL-17,抗原特异性的Th17细胞的频率也高于正常对照,揭示Th17细胞可能在宿主抵抗白色念珠菌感染的保护性免疫中具有一定的作用。
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