【摘 要】
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目的通过对比分析ASD患儿与健康对照组儿童肠道微生物的差异及肠道菌群与ASD患儿行为的相关性,探讨肠道微生物在ASD发病机制中所起的作用,提高对ASD的认识及进一步指导临床治疗。方法本研究采集2020年05月至2021年03月在山东大学齐鲁医院儿童保健门诊病历信息,纳入符合研究标准的首次确诊ASD患儿34例,作为ASD组,其中男性患儿29例,女性患儿5例,健康对照组72例,作为NT组。满足入组条件
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目的通过对比分析ASD患儿与健康对照组儿童肠道微生物的差异及肠道菌群与ASD患儿行为的相关性,探讨肠道微生物在ASD发病机制中所起的作用,提高对ASD的认识及进一步指导临床治疗。方法本研究采集2020年05月至2021年03月在山东大学齐鲁医院儿童保健门诊病历信息,纳入符合研究标准的首次确诊ASD患儿34例,作为ASD组,其中男性患儿29例,女性患儿5例,健康对照组72例,作为NT组。满足入组条件的所有患儿采集粪便标本,均进行16SrRNA高通量基因测序,分析两组样本在肠道菌群多样性、各分类水平结构的组成成分及肠道功能预测等方面的差异及ASD患儿行为与肠道菌群的相关性。结果比较两组的Alpha多样性指标,包括Shannon指数（P=0.8577）、Simpson指数（P=0.847）及Chao1指数（P=0.6822）,均无统计学意义（P>0.05）,提示ASD组和NT组肠道菌群的Alpha多样性不具有差异。应用PCA及PcoA等方法对组间菌群多样性进行分析,结果显示:根据Bray-Curtis距离进行PCoA分析,ASD患儿的肠道微生物群与NT组的肠道微生物群具有差异性（P<0.05）,而根据Weighted Unifrac距离和Unweighted Unifrac距离进行的PCoA及PCA分析显示两组微生物群未见明显聚类分开,不具有差异性（P>0.05）。在各分类水平,CloClostridiaceae及LacRoseburia在ASD组丰度较NT组高,BacActinobacteria、ActActinobacteria、ActCoriobacteriia 等均在NT 组丰度更高。两组肠道功能预测提示ASD组微生物群的功能在聚糖的生物合成和代谢、转录相关蛋白、细胞凋亡、抗坏血酸盐及藻酸盐代谢、己内酰胺降解及香叶醇的降解的作用均弱于NT组,而在细菌运动蛋白及鞭毛组装方面则是ASD组肠道菌群发挥了更大的作用。肠道微生物的改变与ASD患儿的行为具有相关性。应用Spearman方法对肠道微生物及ASD患儿进行相关性分析,结果提示:根据ADOS 分析,ProDeltaproteobacteria（r=0.397,P=0.044）、DesBilophila（r=0.463,P-0.017）与ASD患儿刻板行为及局限兴趣呈正相关,且具有统计意义（P<0.05）,而与沟通及社会性互动无明显相关性。根据GESELL量表分析,Phascolarctobacterium（r=-0.425,P=0.038）与粗大动作评分呈负相关,OdoOdoribacter（r=-0.428,P=0.037）、Bac Odoribacteraceae（r=-0.480,P=0.018）与应物能评分呈负相关,Pro Deltaproteobacteria（r=-0.416,P=0.043）、Desulfovibrionales（r=-0.416,P=0.043）、BacBarnesiellaceae（r=-0.451,P=0.027）、DesBilophila（r=0.430,P=0.036）均与言语能评分呈负相关,而BacS24-7则与应人能评分呈正相关（r=0.625,P=0.001）。根据CARS分析,除了BacS24-7与行为评分呈负相关（r=-0.506,P=0.032）,ProDeltaproteobacteria（r=0.570,P=0.013）、GamPseudomonadales（r=0.505,P=0.032）、MolRF39（r=0.562,P=0.015）、PseMoraxellaceae（r=0.730,P=0.001）、MorAcinetbacter（r=0.730,P=0.001）及DesBilophila（r=0.576,P=0.012）均与行为呈正相关关系。结论1.ASD患儿与NT受试者肠道微生物Alpha多样性无明显差异,但肠道微生物结构发生了变化,主要表现为有害菌的增加及有益菌的减少。2.ASD患儿与NT受试者肠道微生物功能存在差异。3.ASD患儿行为与肠道菌群具有相关性。
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