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目的:定量检测CINⅠ、CINⅡ和CINⅢ中宫颈脱落细胞高危型HPVDNA以及活检组织PCNA的表达。结合病人临床病理资料综合分析高危型HPVDNA及PCNA与CIN的关系,探讨高危型HPVDNA及PCNA定量分子参数测定在CIN分级诊断中的意义。
方法应用第二代杂交捕获技术检测10例CINⅠ、9例CINⅡ和12例CINⅢ患者宫颈脱落细胞高危型HPVDNA;应用免疫组化技术在蛋白水平检测PCNA的表达,并用捷达801形态学图像分析系统进行分析。
结果①CIN中,高危型HPV阳性率为67.74%,其中,CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ的阳性率分别为40.00%、66.67%、91.67%,高危型HPV在不同级别CIN中的阳性表达率,随CIN级别的增加而增加,差异有统计学意义(x2=6.46,P<0.05)。
②CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ的高危型HPVDNA负荷量的平均值(ng/L)分别为71.41、320.07、527.37,随着CIN级别的增加,高危型HPVDNA负荷量增加,差异有统计学意义。(F0.05(2,29)=43.55,P<0.05)。
③PCNA阳性表达率在CIN上皮的上、中、下层不同,上1/3层阳性细胞所占的比例较小,越靠近基底膜,阳性细胞的比例越大;不同级别CIN的PCNA的阳性表达率在各层上皮也存在显著差异,在上皮上、中1/3层,随着CIN级别的升高,阳性细胞的比例逐渐增加,而在下1/3层,则出现了相反的结果。不同级别CIN在上皮各层PCNA阳性率的差异有统计学意义(x2=101.01,P<0.05)。
④PCNA定量分子参数Si-90在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ中分别为0.35、0.48、0.60,随着CIN级别的增加而增加,差异有统计学意义(F0.05(2,29)=9.20,P<0.05)。
⑤随着高危型HPVDNA值的增加,PCNA-Si90呈现增高趋势,两者呈正的直线相关关系(r=0.48,t=2.95,P<0.05)。
结论①高危型HPV感染和CIN有着密切的关系,其阳性率及负荷量均随CIN级别的增加而增加。
②CIN上皮中PCNA阳性细胞在上皮上、中、下1/3各层中的分布不同,不同级别CIN在各层中的分布比例存在显著差异。PCNA-Si90是衡量CIN上皮细胞增殖程度的较客观的定量参数,可以作为CIN分级诊断的辅助手段之一。
③CIN中,随着高危型HPVDNA负荷量的增加,PCNA-Si90也呈现增高趋势,两者具有直线相关性。联合应用HC-Ⅱ检测高危型HPVDNA负荷量和免疫组化定量检测PCNA-Si90可能可以成为CIN的分级诊断的辅助方法。