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近年几来,随着环境和水源的污染,水产品中重金属污染日益严重,水产品的质量情况关系着每消费者的生命安全,重金属含量的快速检测已成为食品安全检测热点之一。目前,应用酶联免疫法检测食品中铅、汞、铬、镉等重金属元素已有报道,但尚未见砷元素的ELISA检测试剂盒。研究中,用螯合剂将砷元素与载体蛋白偶联合成了具有免疫原性的人工抗原,免疫动物获得多克隆抗体,建立了检测砷元素的间接竞争ELISA检测方法,并用于水产品(鱼肉、鱼皮、红虾、青虾)中总砷含量的检测,获得了满意的效果。主要研究内容及结果如下:1、砷元素人工抗原的合成与鉴定合成砷元素人工免疫抗原及人工包被抗原,制备砷的多克隆抗体,为建立ELISA快速检测方法提供抗原和抗体。试验以异硫氰酸苄基乙二胺四乙酸(ITCBE)为螯合剂,将砷与载体蛋白BSA、OVA和KLH偶联,制备了人工抗原As3+-ITCBE-BSA、As3+-ITCBE-OVA及As3+-ITCBE-KLH;经核酸蛋白仪的检测、紫外分光光度计扫描以及SDS-PAGE电泳定性鉴定,并用氢化物原子荧光法(HG-AFS)检测了人工抗原中As3+的含量。结果:合成的As3+-ITCBE-BSA、As3+-ITCBE-OVA和As3+-ITCBE-KLH蛋白浓度分别为4.692 mg/mL、5.726 mg/mL和4.556 mg/mL;紫外扫描最大吸收峰发生偏移;电泳条带对于各自载体蛋白稍微滞后;As3+的含量分别为0.254 mg/mL、0.190 mg/mL、0.243 mg/mL,偶合率达到70.67%、52.81%和67.61%。结果显示以上三种人工抗原合成成功,可用于元素砷多克隆抗体的制备。2、砷元素多克隆抗体的制备与鉴定为建立砷元素ELISA检测方法,将人工免疫抗原AS3+-ITCBE-BSA,用弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂包埋免疫抗原后,颈背部皮下注射Balb/c小鼠和新西兰大白兔,每间隔2周免疫一次,四免后收集血清,制备了多克隆抗体;用Protein A柱对多克隆抗体进行了纯化,测定了其浓度;通过间接ELISA方法,筛选了最佳包被抗原,并测定了血清效价、灵敏性和特异性;将As3+-EDTA标准螯合物溶液作抑制剂,用间接竞争ELISA方法,绘制了As3+-EDTA对多克隆抗体的竞争抑制曲线,测定其检测限和灵敏度;并通过As3+与Pb2+、Hg2+、Cd2+重金属离子的交叉反应试验,测得各交叉反应率。结果:检测多克隆抗体OD280nm值为1.973;包被抗原As3+-ITCBE-KLH较AS3+-ITCBE-OVA包被效果更理想;2号、4号小鼠多克隆抗体血清效价达1:6400,2号新西兰大白兔的血清效价达1:4×104;抑制曲线回归方程为y=-0.2657x+1.1618,R2=0.9859,IC50值达到2.4907μg/L;砷元素与其他金属元素无交叉反应,制备的As3+多克隆抗体具有较强的特异性。因此,2号新西兰大白兔的多克隆抗体可用于砷元素ELISA检测方法的建立。3、砷元素ELISA检测方法的建立与初步应用通过间接竞争ELISA方法测定包被抗原和抗体最佳工作浓度,建立砷元素ELISA检测方法。结果:最佳包被抗原As3+-ITCBE-KLH浓度为1.5μg/mL,抗体稀释倍数为1:1500;标准曲线回归方程为y=-0.2672x+1.158,R2=0.9913,IC50值为2.4626μg/L,检测限IC15值为3.772μg/L。分别用干灰化法和湿消化法进行样品前处理,用银盐法、ELISA方法和HG-AFS法检测样品中的总砷含量,并进行了回收率试验。结果:干灰化法处理的样品,ELISA方法与银盐法检测样品中总砷的含量差异极显著(P<0.01),与HG-AFS法差异不显著(P>0.05);用湿消解法处理的样品,ELISA方法与银盐法检测样品中总砷的含量差异显著(0.05>P>0.01),与HG-AFS法差异不显著(P>0.05);且干灰化法处理样品检测结果优于湿消解法,建议首选干灰法作为水产品的处理方法;用不同种方法检测同种样品时,检测效果为HG-AFS法>ELISA方法>银盐法。检测样品回收率为HG-AFS法银盐法>ELISA方法>银盐法;鱼皮、鱼肉样品中中总砷含量低于国家规定的标准限量0.05mg/kg,但红虾和青虾中总砷含量超出了国家标准限量。