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目的在小鼠大脑中动脉阻塞模型中,利用硫化氢供体ADT-OH延迟给药能否通过激活AMPK通路,增强缺血再灌注后脑内小胶质/巨噬细胞由M1型极化状态向M2型极化状态转变,从而促进卒中小鼠的长期脑修复及功能修复。方法利用线栓法制作小鼠大脑中动脉栓塞模型,缺血1 h后再灌注。小鼠再灌注24 h后,ADT-OH给药组腹腔注射ADT-OH(50mg/kg),溶剂对照组注射同等剂量溶剂,直至手术后30天。ADT-OH给药组小鼠与溶剂对照组小鼠每日进行小鼠神经功能缺损评分(m Nss)和转角试验评分(Corner test),并且在手术后第3、7、14、28天进行转棒实验(Rota-rod test),以此3种行为学实验作为依据,对小鼠神经功能恢复进行评价。30天后收取脑组织,以Western Blot方法检测缺血再灌注后第3天及第14天的ADT-OH给药组、溶剂对照组小鼠大脑皮层中AMPK磷酸化水平;以Real-time PCR方法测定缺血再灌注后第3、7、14、30天ADT-OH给药组、溶剂对照组小鼠大脑皮层组织中M1型炎症因子(CD32、IL-1β、TNF-α)和M2极化标志因子(CD206、Arginase 1)m RNA表达量水平的变化;以ELISA方法测定缺血再灌注后第3、14天ADT-OH给药组、溶剂对照组小鼠大脑皮层组织中M2型炎症因子(IL-10)和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白质表达量水平的变化;以免疫组织化学方法检测缺血再灌注后第30天ADT-OH给药组、溶剂对照组小鼠大脑皮层组织缺血半暗带区域血管新生。采用LPS诱导BV-2小胶质细胞的M1极化,研究ADT-OH能否通过促进BV-2细胞的M2极化,引发脑血管内皮(b End 3)细胞的体外血管新生。采用神经元细胞缺糖缺氧(OGD)模型刺激BV-2细胞诱发炎症反应,模拟卒中后脑内微环境,研究ADT-OH能否在类似卒中后微环境下影响脑血管内皮细胞(b End 3)细胞的体外血管新生。利用TTC染色法比较缺血再灌注96 h ADT-OH给药组和溶剂对照组梗死面积差异,利用脑萎缩率比较缺血再灌注30天药组和溶剂对照组脑萎缩差异,探究ADT-OH的延迟给药能否对梗死面积保护产生影响。结果小鼠大脑中动脉栓塞模型中,行为学实验结果表明,ADT-OH(50mg/kg)延迟给药能够显著改善小鼠脑缺血后的长期神经功能恢复。由Western Blot结果显示,ADT-OH给药组小鼠在第3天以及第14天时,脑皮层组织中AMPK的磷酸化水平明显高于溶剂对照组小鼠(P<0.05)。Real-time PCR结果显示,缺血再灌注第3、7、14、30天时,与溶剂对照组小鼠相比,ADT-OH组小鼠大脑皮层组织中,M1型炎症因子(CD32、IL-1β、TNF-α)m RNA表达水平在各个时间点上表达水平明显降低(P<0.05);而与此同时M2型炎症因子(CD206、Arginase 1)在相同时间点上表达水平明显升高(P<0.05)。ELISA结果显示在再灌注3天、14天时,ADT-OHADT-OH给药组小鼠大脑皮层M2因子IL-10较之溶剂对照组小鼠有明显升高(P<0.05)脑组织切片免疫组化结果显示,缺血再灌注30天后,ADT-OH给药组大脑皮层萎缩边缘区血管新生明显多于溶剂对照组。在LPS刺激BV-2细胞或神经元OGD后条件上清液刺激诱导BV-2细胞M1极化的两种炎症模型中,ADT-OH共处理能很明显的诱导b End 3细胞在体外生成血管样结构,然而ADT-OH本身却无促血管新生功能;ELISA结果显示在再灌注3天、14天时,ADT-OH给药组小鼠大脑皮层中促血管生成因子v EGF较之溶剂对照组小鼠有明显升高(P<0.05)。结论小鼠大脑中动脉栓塞模型中,硫化氢供体ADT-OH的延迟给药能够促进缺血小鼠脑修复及长期神经功能的康复,作用机制是ADT-OH在脑缺血后激活AMPK从而促进缺血部位的小胶质/巨噬细胞由M1型活化状态向M2型活化状态极化,从而促进缺血区血管新生和组织修复有关。