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目的:观察大黄游离蒽醌对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)大鼠肠淋巴系统特异性和非特异性免疫功能的影响,并探讨肠道菌群变化与肠淋巴系统免疫功能间的相关性。方法:(1)健康雄性SD大鼠18只,随机分为:假手术(control,C)组、SAP模型(modle,M)组、大黄游离蒽醌干预(Free anthraquinone,F)组。造模24 h后采集大鼠肠系膜淋巴结(mesenteric lymph nodes,MLN)和小肠组织进行石蜡包埋,另取部分MLN制备细胞悬液。光镜下观察MLN的HE染色病理组织学改变;免疫荧光法(Immunofluorescence,IF)测定MLN和小肠中核苷酸结合寡聚化结构域样受体(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptors,NLRP3)与凋亡相关的斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD domain,ASC)的表达;免疫组织化学(Immuno histochemistry,IHC)测定MLN和小肠半胱氨酸天冬氨酸酶-1(Caspase-1)的表达及小肠中SIg A的表达。流式细胞术(Flow cytometry,FCM)测定MLN细胞悬液的Th1/Th2比值及Foxp3标记的Treg比例。(2)采用逆行胰胆管缓慢注射3.5%的无菌注射牛磺胆酸钠制作大鼠SAP模型,健康雄性SD大鼠18只,随机分为:假手术(C)组、SAP模型(M)组、大黄游离蒽醌干预(F)组,造模后24 h,碘伏消毒肛门,EP管采集大鼠粪便,冻存于-80℃,超低温冰袋运送至上海微基生物科技有限公司进行菌群分析。结果:(1)所有大鼠的优势细菌一致,均是拟杆菌门(Bacteroidetes)、变形菌门(Proteobacteria)和厚壁菌门(Firmicutes)。C组中拟杆菌门和厚壁菌门占的相对丰度比较大;变形菌的相对丰度比很少。与C组相比较,M组的菌群中厚壁菌门与拟杆菌门的相对丰度比明显降低,而变形菌门的相对丰度比显著升高。F组厚壁菌门与拟杆菌门的相对丰度比较M组有所提高,变形菌门的相对丰度比例有所降低。M组多样性较C组显著降低,F组菌群多样性有所升高。(2)光镜下观察大鼠小肠及MLN组织病理学改变,M大鼠小肠粘膜上皮变性坏死,绒毛脱落严重,粘膜及粘膜下血管扩张、出血较多、炎性细胞浸润;F组小肠病变明显减轻,部分绒毛融合、缺损,固有层充血水肿,有少量炎性细胞浸润。M组较C组淋巴小结增大,皮质区增厚,皮质区淋巴小结数量增加;F组与M组相比较,皮质区淋巴小结数量少,体积小。IF检测显示,M组大鼠小肠及MLN的NLRP3和ASC的表达均上调;F组NLRP3和ASC的表达均有所下调。IHC法检测显示,M组大鼠小肠及MLN的Caspase-1表达明显上调;F组Caspase-1表达有所下调。而M组SIg A的表达明显下调;F组SIg A的表达有所上调。FCM检测显示,MLN中Th1的表达M组较C组明显上调(P<0.05);F组较M组下调(P<0.05)。Th2的表达M组较C组明显下调(P<0.05);F组较M组明上调(P<0.05)。M组Th1/Th2比例较C组明显上调(P<0.05);F组较M组下调(P<0.05)。M组的CD4~+CD25~+Foxp3~+明显高于C组(P<0.05);F组与M组相比较显著降低(P<0.05)。M组的Treg比例明显高于C组(P<0.05);F组与M组相比较显著降低(P<0.05)。(3)肠道菌群变化与肠淋巴系统免疫功能间的相关性分析表明:菌群多样性分别与小肠及MLN中NLRP3、ASC、caspase-1、Th1、Treg表达呈显著负相关(P<0.01);与SIg A、Th2表达呈显著正相关(P<0.01)。变形菌门数量分别与小肠及MLN中NLRP3、ASC、caspase-1、Th1、Treg表达呈显著正相关(P<0.01);与SIg A、Th2表达呈显著负相关(P<0.01)。拟杆菌门和厚壁菌门与肠淋巴系统免疫应答间的相关性均不显著。结论:SAP早期出现了肠道菌群多样性改变、变形菌门数量激增等肠道菌群紊乱,大量细菌内毒素的产生将诱发过激的肠淋巴系统免疫应答,过激的固有和特异免疫应答产生大量炎性因子,经淋巴管途径远处移位造成多器官损伤。大黄游离蒽醌可能通过改善肠道菌群失衡,进而抑制过激的肠淋巴系统免疫应答发挥多器官保护作用。