论文部分内容阅读
目的:观察粘着斑激酶在增生性瘢痕成纤维细胞中的表达情况,并观察A型肉毒毒素作用后,成纤维细胞中粘着斑激酶及相关蛋白表达的差异性。探索A型肉毒毒素对增生性瘢痕成纤维细胞增殖、凋亡及迁移的作用,并进一步探究A型肉毒毒素抑制增生性瘢痕的作用机制,为临床应用A型肉毒毒素抑制增生性瘢痕提供理论依据。方法:实验研究的组织标本来源于2016年10月至2018年2月北部战区总医院整形外科就诊的患者。实验研究纳入标准:经术前临床诊断及术后病理检查确诊为增生性瘢痕,患者无全身系统性疾病,术前未接受过任何抑制增生性瘢痕治疗,于我科接受手术切除治疗。实验组标本:手术切除后的增生性瘢痕组织,随机选取6例作为实验组。对照组标本:对照组标本均来自手术区域,为局部皮瓣转移后多余的正常皮肤组织及正常瘢痕组织。对成纤维细胞进行体外分离、培养,用0.05 U、0.1 U浓度的A型肉毒毒素对增生性瘢痕成纤维细胞进行作用,对照组未应用A型肉毒毒素。通过MTT实验观察A型肉毒毒素对增生性瘢痕成纤维细胞增殖的作用情况。利用Annexin V/PI染色,观察不同浓度A型肉毒毒素对增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的作用情况。通过Transwell实验,观察A型肉毒毒素对增生性瘢痕成纤维细胞迁移的作用情况。通过Western blot实验,观察粘着斑激酶在正常皮肤、普通瘢痕及增生性瘢痕三种组织中的表达情况;分别应用不同浓度的A型肉毒毒素作用于体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞后,通过Western blot实验检测成纤维细胞中黏着斑激酶及相关蛋白的表达情况。记录实验数据和结果,并进行统计学分析。结果:MTT实验结果显示,与对照组相比,不同浓度A型肉毒毒素作用于增生性瘢痕成纤维细胞后,细胞的增殖受到抑制,0.1 U浓度比0.05 U浓度的抑制作用强。流式细胞仪显示,Annexin V/PI染色后,0.05 U及0.1 U浓度A型肉毒毒素作用后,增生性瘢痕成纤维细胞的凋亡率分别为3.8%、6.9%,对照组为1.2%。Transwell实验结果显示,A型肉毒毒素作用于增生性瘢痕成纤维细胞后,细胞的迁移受到抑制,并且0.1 U浓度比0.05 U浓度的抑制作用强。Western blot实验结果显示,三种标本成纤维细胞中,黏着斑激酶磷酸化形式FAKp-Tyr397在增生性瘢痕成纤维细胞中具有差异性表达。不同浓度的A型肉毒毒素作用后,增生性瘢痕成纤维细胞中黏着斑激酶总的表达水平没有影响,FAKp-Tyr397较对照组表达水平降低。增殖相关蛋白CDK4及凋亡相关蛋白Bcl-2表达水平均降低,并且0.1 U浓度组比0.05 U浓度作用明显。结论:1、A型肉毒毒素能够抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖。2、A型肉毒毒素能够促进增生性瘢痕成纤维细胞的凋亡。3、A型肉毒毒素能够抑制增生性瘢痕成纤维细胞的侵袭及迁移。4、增生性瘢痕中黏着斑激酶磷酸化形式FAKp-Tyr397表达增高。5、A型肉毒毒素能够抑制增生性瘢痕成纤维细胞中FAKp-Tyr397及相关蛋白的表达。