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巯基物质在卵母细胞的体外成熟培养中是一种重要的成分,虽然在实验中已有人使用,但并没有系统的对巯基物质的种类,使用的剂量等对卵母细胞体外成熟培养的影响研究过。本实验主要研究半胱氨酸,谷胱甘肽(GSH),β-巯基乙醇,巯基乙胺对延边黄牛卵母细胞的体外成熟及体细胞克隆胚胎体外发育的影响,从而提高延边黄牛体细胞克隆的效率。利用屠宰后剪取牛卵巢,用抽吸法回收卵母细胞,然后在不同种类,浓度巯基物质中进行卵母细胞的体外成熟培养,最后将成熟的卵母细胞经核移植所构建的重组胚进行体外培养。得出实验结果如下：1.在成熟液中添加不同浓度的半胱氨酸对延边黄牛卵母细胞体外成熟影响的试验中,添加0.56mmol／L组显著高于其它各组(P<0.05),所以确定0.56mmol／L是单独使用半胱氨酸时最适合于延边黄牛卵母细胞体外成熟的最佳浓度。2.在成熟液中添加不同浓度的GSH对延边黄牛卵母细胞体外成熟影响的试验中,1.0mmol／L和1.5mmol／L两组之间差异不显著(P>0.05),但与其它组比较差异显著(P<0.05),且1.0mmol／L组最高。所以确定1.0mmol／L是单独使用GSH最适合于延边黄牛卵母细胞体外成熟的最佳浓度。3.在成熟液中添加不同浓度的β-巯基乙醇对延边黄牛卵母细胞体外成熟影响的试验中,添加100umol／L与150umol／L两组之间差异不显著(P>0.05),但与其它各组比较差异显著(P<0.05),所以确定100umol／L是单独使用β-巯基乙醇最适合于延边黄牛卵母细胞体外成熟的最佳浓度。4.在成熟液中添加不同浓度的巯基乙胺对延边黄牛卵母细胞体外成熟影响的试验中,添加100umol／L组与50umol／L组,150umol／L组差异不显著(P>0.05),但显著高于对照组和200umol／L组,所以确定100umol／L是单独使用巯基乙胺时最适合于延边黄牛卵母细胞体外成熟的最佳浓度。5.在成熟液中联合添加已确定浓度的药品对延边黄牛卵母细胞体外成熟影响的试验中,半胱氨酸和巯基乙胺联合添加组与半胱氨酸和β-巯基乙醇联合添加组之间差异不显著(P>0.05),但都显著高于对照组和GSH组(P<0.05),所以确定半胱氨酸和巯基乙胺联合添加最适合于延边黄牛卵母细胞体外成熟。6.在成熟液中添加不同浓度的半胱氨酸对延边黄牛体细胞克隆效率影响的试验中,在卵裂率方面,0.56mmol／L组与0.28mmol／L组,0.84mmol／L组差异不显著(P>0.05),但与对照组和1.12mmol／L组差异显著(P<0.05),说明0.56mmol／L组最高；在囊胚率上,添加药物组之间差异不显著(P>0.05),但0.56mmol／L组显著高于对照组(P<0.05),所以确定0.56mmol／L是单独使用半胱氨酸时最适合于延边黄牛体细胞克隆的最佳浓度。7.在成熟液中添加不同浓度的GSH对延边黄牛体细胞克隆效率影响的试验中,在卵裂率上,1.0mmol／L与1.5mmol／L组之间差异不显著(P>0.05),但1.0mmol／L组显著高于其他各组(P<0.05),说明1.0mmol／L是卵裂的最佳浓度；在囊胚发育率上,添加药物组之间差异不显著(P>0.05),但1.0mmol／L组显著高于对照组(P<0.05),所以确定1.0mmol／L是单独使用GSH时最适合于延边黄牛体细胞克隆的最佳浓度。8.在成熟液中添加不同浓度的β-巯基乙醇对延边黄牛体细胞克隆效率影响的试验中,在卵裂率上,100umol／L组与50umol／L组,150umol／L组差异不显著(P>0.05),但与对照组和200umol／L组差异显著(P<0.05),所以确定100umol／L是卵裂的最佳浓度；在囊胚发育率上,添加药物组之间差异不显著(P>0.05),但100umol／L组显著高于对照组(P<0.05),所以确定100umol／L是单独使用β-巯基乙醇时最适合于延边黄牛体细胞克隆的最佳浓度.9.在成熟液中添加不同浓度的巯基乙胺对延边黄牛体细胞克隆效率影响的试验中,在卵裂率上,添加100umol／L组与50umol／L组,150umol／L组差异不显著(P>0.05),但显著高于对照组和200umol／L组,说明100umol／L效果最佳；在囊胚发育上,添加药物组之间差异不显著(P>0.05),但100umol／L组显著高于对照组(P<0.05)。所以确定100umol／L是单独使用巯基乙胺时最适合于延边黄牛体细胞克隆的最佳浓度。10.在成熟液中联合添加已确定浓度的药品对延边黄牛体细胞克隆效率影响的试验中,在卵裂率方面,半胱氨酸和巯基乙胺联合添加组与半胱氨酸和β-巯基乙醇联合添加组之间差异不显著(P>0.05),但都显著高于对照组和GSH组(P<0.05),说明半胱氨酸和巯基乙胺联合添加是卵裂的最佳药物；在囊胚发育率上,半胱氨酸和巯基乙胺联合添加组与半胱氨酸和β-巯基乙醇联合添加组之间差异不显著(P>0.05),但显著高于对照组和GSH组(P<0.05),说明半胱氨酸和巯基乙胺联合添加最适合于延边黄牛体细胞克隆。