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细胞从静息期(G0)进入细胞周期的过程,即G0/G1转换,具有重要的研究价值,但目前人们对其复杂的调控机制却知之甚少。其中一个重要原因是缺乏理想的细胞周期模型。我们通过血清饥饿的方法建立了同步化效果高达94%以上的A549G0/G1转化模型,并用G1期细胞周期特征分子CyclinD1的表达验证了同步化效果。
为了研究G0/G1转换过程中的分子调节机制,我们采用了同位素硫35标记的蛋氨酸/半胱氨酸对此细胞周期转换的特殊过程进行了脉冲代谢标记,继而采用双向凝胶电泳分离不同时间点的蛋白质组。对于每张双向电泳图谱,我们首先用考马斯亮蓝进行染色从而检测每一蛋白质总量的变化。而后将其制成干胶曝光后得到各个时间点新合成的蛋白组图谱,在我们的图谱中含有大量的蛋白合成动态变化信息。通过双向电泳软件分析得到表达量或总量差异两倍以上明显的差异蛋白点164个,用ESI-TOF质谱鉴定共得到差异蛋白98个。用AmiG0程序,我们在GeneOntology数据库中的BiologicalProcess和MolecularFunction的Annotation将这些差异蛋白进行了termenrichment。结果显示了G0/G1转化过程与众多细胞生理过程紧密相关,具有高度的复杂性和动态性。暗示出G0-G1存在复杂的调控机制。