油菜是我国重要的油料作物,食用菜籽油占国内食用植物油供应量的50%以上,与全国人民的生活息息相关。而合理的株型可以在很大的程度上提高叶面积指数,使群体的光合效率在一定程度上提升,对提高油菜产量具有十分重要的实际意义,而分枝角度是油菜株型结构的重要方面。因此,研究油菜分枝角度的相关基因及其作用机理具有重要意义。本课题组前期利用QTL定位及全基因组关联分析,在C03染色体上找到与油菜分枝角度形成相关的候选基因Bna C03g06250D,有研究表明LAZY1基因是通过改变生长素的分布来调节腋芽的向地性。在NCBI数据库中通过序列比对,发现在甘蓝型油菜中LAZY1基因一共有4个拷贝,除了候选基因Bna C03g06250D外,还有Bna A03g04710D、Bna A10g19550D和Bna C09g54600D。本课题组前期成功的克隆了4个拷贝的CDS序列,研究发现LAZY1基因在甘蓝型油菜中主要是在初花期的主茎及侧枝中表达,利用亚细胞定位发现LAZY1基因CDS的N端定位在胞核上,CDS的C端定位在胞膜上。本研究主要开展了突变体拟南芥互补实验;转基因油菜的阳性鉴定;极端材料的各个主要部位的生长素进行含量的测定;与此同时对上游启动子进行核心区域确定,对下游互作蛋白进行了筛选。在本文中,将构建Bna A03g04710D、Bna A10g19550D基因的载体统一命名LAZY1-1、LAZY1-2。主要结论如下:1、互补实验分析发现:以HY002（紧凑型）的Bna A10g19550D为基因源的阳性转基因植株的分枝角度从原来的大于等于95°变化到42°左右,并且直立向上生长;而以03杂-1（松散型）Bna A10g19550D为基因源的阳性转基因植株分枝角度也明显变小了,还有一部分存在匍匐生长的现象。这说明了LAZY1基因确实能够调控分枝角度的大小。2、通过油菜转基因阳性鉴定发现敲除LAZY1基因的转基因植株的分枝角度为40°,对照ZS11的分枝角度为32°,分枝角度大了约10°。而超表达植株中LAZY1基因的表达量与对照相比高出几十倍。3、Godbole等推断LAZY1基因的作用位点在平衡石感受重力与生长素极性运输之间。因而本实验设计了极端材料各部位生长素含量的测定实验。通过实验发现:在极端材料的主蕾中,LAZY1基因的含量与生长素的分布呈正相关。其他部位生长素含量差异不一,但总的来说,所有材料中几乎是侧枝中上部含量较多,同本课题组前期定量研究中初花期基因表达量基本上也是中上部最多结果相同,由此推测生长素的分布与基因表达量呈正相关。4、通过对启动子5’端截短进行烟草瞬时表达发现,Bna A03g04710D-1500启动子的核心区域位于-130～0bp（以ATG的A为+1bp）,Bna A10g19550D-1500启动子的核心区域位于-248～-109bp处。对Bna A03g04710D及Bna A10g19550D的1500bp启动子核心区域进行顺式作用元件预测,发现共同含有MRE元件,进而推测LAZY1基因的核心启动子元件是MRE（MYB结合位点参与光反应）。推测LAZY1基因的表达与光反应存在极其紧密的联系,光照会影响LAZY1基因的表达。5、对LAZY1蛋白进行了互作蛋白的筛选,筛选到了两个阳性克隆子,一个是Bna Cnng05760D,它的分子功能是负责阴离子跨膜转运,另外一个是Bna C03g75880D,这个基因是泛素样结构域超家族的,负责RNA加工。