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抗病毒蛋白作为一类新型的潜在抗病毒药物,一直是国内外的研究热点,有学者曾报道家蝇体内含有抗病毒活性物质。家蝇(Musca domestica L.),属于昆虫纲(Insccta)、双翅目(Diptera)、环裂亚目(Cyclorrhapha)、蝇科(Muscidae)。本文以家蝇幼虫为材料,提取了蝇蛆蛋白,检测了其抗病毒及抗肿瘤活性,主要研究结果如下:
1.通过索氏提取从家蝇幼虫体内得到一种脱脂蛋白,利用伪狂犬病毒(Pseudorabies Virus,PRV)为靶标病毒,鸡胚成纤维细胞(CEF)为病毒载体,研究了家蝇幼虫体内粗提脱脂蛋白的抗病毒活性。研究发现,PRV病毒与粗提蛋白(0.1mg/ml)在室温下混合2小时后,滴度从原来的5.62×104(TCID50 ml-1)下降至3.16×104,说明粗提蛋白对PRV病毒存在抑制活性；感染前1小时和感染后1小时加入粗提蛋白测得的病毒滴度分别为3.16×104和1.0×104,表明粗提蛋白可能对病毒的吸附注入阶段敏感。
2.研究了粗提蛋白对PRV病毒在CEF细胞上吸附注入阶段的影响作用:在病毒感染前1和2小时加入粗提蛋白,在病毒感染2小时后收集细胞培养瓶上清液,测得病毒滴度分别为5.62×104和2.51×104,上清液中仍然含有大量病毒,表明在病毒感染前加入粗提蛋白,可以影响PRV病毒对CEF细胞的吸附注入作用。
3.利用离子交换色谱分离纯化家蝇幼虫粗提蛋白后回收得到2个峰,A1和A2。分别测定各组分的抗病毒活性发现,A2纯化蛋白(0.2mg/ml)在与病毒混合作用后,使病毒的滴度由5.62×104降至3.75×104,A1纯化蛋白对病毒滴度没有影响。
4.利用MTT法分别对A1和A2纯化蛋白进行了抗肿瘤A549细胞的活性抑制研究,结果表明A1纯化蛋白对A549细胞没有任何作用,而A2纯化蛋白对A549细胞有明显的抑制作用,且随着A2蛋白浓度提高,抑制率上升,说明A2纯化蛋白是我们需要的目标蛋白。
本实验通过对家蝇幼虫抗病毒蛋白的抗PRV病毒和抗A549肿瘤细胞的研究,为昆虫抗病毒活性蛋白的研究提供了试验依据。